[發明專利]一種柑橘黃龍病快速檢測方法在審
| 申請號： | 202011065602.7 | 申請日： | 2020-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN112195223A | 公開（公告）日： | 2021-01-08 |
| 發明（設計）人： | 趙春江;董宏圖;張晗;王曉冬;羅斌;王成;侯佩臣;李愛學 | 申請（專利權）人： | 北京農業智能裝備技術研究中心;北京農業信息技術研究中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 陳征 |
| 地址： | 100097 北京市海淀區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 柑橘 黃龍 快速 檢測 方法 | ||
1.一種柑橘黃龍病快速檢測方法，包括：
提供從待測植物中獲得的柑橘黃龍病病菌DNA；其中，所述柑橘黃龍病病菌DNA的濃度為20ng/μl；
以所述柑橘黃龍病病菌DNA為模板進行3次PCR擴增，擴增循環數分別為20-25次、25-30次和30-40次；
對擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統得到擴增結果；
根據擴增結果獲得待測植物柑橘黃龍病的發病程度。
2.根據權利要求1所述柑橘黃龍病快速檢測方法，其中，所述的柑橘黃龍病病菌是指韌皮部桿菌(Candidatus Liberibacter spp.)。
3.根據權利要求1所述柑橘黃龍病快速檢測方法，其中，是從待測植物的葉片中提取獲得柑橘黃龍病病菌。
4.根據權利要求1所述柑橘黃龍病快速檢測方法，其中，所用的特異性擴增引物為：
Hlbsf 5'→3'TGTAAAGCTCTTTCGCCGGA
Hlbsr 5'→3'CTTGACGTCATCCCCACCTT。
5.根據權利要求1所述柑橘黃龍病快速檢測方法，其中，待測植物感病時間為1年-3年，例如1年、2年或3年。
6.根據權利要求1所述柑橘黃龍病快速檢測方法，其中，以所述柑橘黃龍病病菌DNA為模板進行3次PCR擴增時，擴增循環數分別為20次、25次和30次。
7.根據權利要求1所述柑橘黃龍病快速檢測方法，包括：
(1)取不同感病時間的黃龍病菌葉片，剪取葉中脈0.1g，剪成1mm左右碎片；放入2ml試管中，加入直徑為5mm鋼珠，放在研磨設備上進行震蕩研磨5min，頻率30Hz；
(2)將研磨好的植物樣本用試劑盒進行DNA提取，所選試劑盒為StarSpin柱式植物DNA提取試劑盒，得到50μlDNA樣品；
(3)用nanodrop儀器進行DNA濃度測量，并用ddH2O將DNA模板配制成濃度為20ng/μl工作液，待用；
(4)用已配置的工作液為模板，進行3次PCR擴增反應，反應循環數分別為20次、25次和30次；
(5)對擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統得到擴增結果；
(6)根據擴增結果獲得待測植物柑橘黃龍病的發病程度。
8.用于植物柑橘黃龍病快速檢測的引物，所述引物為：
Hlbsf 5'→3'TGTAAAGCTCTTTCGCCGGA
Hlbsr 5'→3'CTTGACGTCATCCCCACCTT。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于北京農業智能裝備技術研究中心;北京農業信息技術研究中心，未經北京農業智能裝備技術研究中心;北京農業信息技術研究中心許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202011065602.7/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
