[發明專利]一種CA125蛋白、編碼基因及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011065277.4
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112126650A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 苑紅霞;王彩虹;黃芳;徐智盼;李勇
• 申請（專利權）人: 南京基蛋生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/85;C07K14/47;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;G01N33/96;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

本申請公開了一種CA125蛋白、其編碼基因以及利用基因工程生產所述CA125蛋白的方法，所述方法通過基因克隆技術通過基因克隆技術將人CA125基因的胞外段部分序列克隆至哺乳動物細胞載體pcDNA3.1Z(+)載體中，C端融入可在HEK293T細胞中實現高效分泌表達的熒光素酶信號肽標簽，并將該質粒轉染HEK293T細胞，經抗性篩選獲得CA125高表達、高活性細胞株，該細胞株能夠分泌表達高活性且穩定性優良的CA125蛋白。

技術領域

本申請屬于生物技術領域，特別涉及一種CA125蛋白、編碼基因及其制備方法和應用。

背景技術

CA125蛋白是由黏蛋白l6(Mucin 16，MUCl6)編碼基因編碼的粘蛋白型糖蛋白，早期數據表明，CA125蛋白是一種分子量在200kd～2000kd之間的高分子糖蛋白，其包括一個短的細胞質結構區、一個跨膜區和一個長的胞外結構區，其中，胞外結構區富含N-或O-連接的糖基化基團。附著于卵巢癌細胞表面的蛋白會發生變化，其長度可能會截短，或者其側鏈的改變，這些都將導致正常細胞與卵巢癌細胞的糖基化模式不同，例如，在惡性卵巢上皮細胞中，核心蛋白Tn的過早唾液酸化能夠導致STn抗原(sialyl Tn抗原)的過度表達，使得血清中CA125蛋白的濃度異常增高。因此，CA125蛋白可以作為篩查卵巢癌等癌癥的特異性標志物。

目前常采用免疫分析法來檢測血漿中CA125蛋白含量，因此，需使用大量高質量的標準品作為對照，作為對照的CA125蛋白質需要活性高、穩定性好，經過長時間貯存且活性穩定。目前市售的CA125蛋白標準品的來源多樣，例如，來自為乳腺癌細胞培養物或人體液。一般高品質CA125蛋白來源于天然提取，但是，由于天然提取的CA125蛋白來源有限，并且，目的蛋白含量低且蛋白結構不均一等原因，嚴重阻礙CA125蛋白標準品等診斷產品的研究和應用，因此，科研人員開始開發利用基因編輯和細胞工程大量生產CA125蛋白的方法。

發明內容

為解決上述問題，本申請提供一種CA125編碼基因、融合有所述CA125編碼基因的重組質粒、利用所述重組質粒在人源細胞株HEK293T細胞中分泌表達制備CA125蛋白的方法以及利用所述方法制備的CA125蛋白。

本申請的目的在于提供以下幾個方面：

第一方面，一種編碼基因，所述編碼基因包括如下(1’)至(3’)中的至少一種：

(1’)如SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(2’)在嚴格條件下與(1’)所示DNA分子雜交，并且編碼CA125蛋白的DNA分子，其中，所述CA125蛋白，其如下(1)或者(2)所示：(1)如SEQ ID No.1所示的蛋白；(2)將SEQ IDNo.1所示的蛋白經過一個或者幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加并且具有相同功能的蛋白；

(3’)與(1’)或者(2’)所述氨基酸分子具有85％以上同一性，并且編碼所述CA125蛋白的DNA分子。

本申請人發現，天然CA125蛋白分子較大，利用本申請提供的編碼基因進行編碼所得蛋白具有與天然CA125蛋白具有相似的活性，可替代天然CA125蛋白，作為檢測CA125蛋白的標準品，然而，利用其它編碼基因編碼所得其它與天然CA125蛋白其余部分結構相似的蛋白則活性較低，無法作為檢測CA125蛋白的標準品。

另外，本申請所提供的編碼基因為優化的人源CA125編碼基因，能夠在人源細胞分泌系統，特別是HEK-293T細胞系統中表達，表達的目的蛋白活性高，穩定好。

第二方面，含有第一方面所述編碼基因的重組質粒、轉染細胞。

在一種可實現的方式中，所述重組質粒由pcDNA3.1 Z(+)載體與第一方面所述CA125編碼基因融合而得。