[發(fā)明專(zhuān)利]一種CA125蛋白、編碼基因及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011065277.4
• 申請(qǐng)日: 2020-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112126650A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 苑紅霞;王彩虹;黃芳;徐智盼;李勇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京基蛋生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/12
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/12;C12N15/85;C07K14/47;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;G01N33/96;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京弘權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長(zhǎng)明;許偉群

1.一種編碼基因，其特征在于，所述編碼基因包括如下(1’)至(3’)中的至少一種：

(1’)如SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(2’)在嚴(yán)格條件下與(1’)所示DNA分子雜交，并且編碼CA125蛋白的DNA分子，其中，所述CA125蛋白，其如下(1)或者(2)所示：(1)如SEQ ID No.1所示的蛋白；(2)將SEQ ID No.1所示的蛋白經(jīng)過(guò)一個(gè)或者幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加并且具有相同功能的蛋白；

(3’)與(1’)或者(2’)所述氨基酸分子具有85％以上同一性，并且編碼所述CA125蛋白的DNA分子。

2.含有權(quán)利要求1所述編碼基因的重組質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒由pcDNA3.1 Z(+)載體與權(quán)利要求1所述CA125編碼基因融合而得，其中，所述pcDNA3.1 Z(+)載體由CMV啟動(dòng)子及6×His分泌信號(hào)肽編碼基因構(gòu)建而成。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其特征在于，所述轉(zhuǎn)染細(xì)胞所用細(xì)胞載體為HEK293T細(xì)胞。

5.一種制備CA125蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

步驟1，將第二方面所述編碼基因克隆至pcDNA3.1Z(+)載體中構(gòu)建分泌表達(dá)載體；

步驟2，利用所述分泌表達(dá)載體制備重組質(zhì)粒；

步驟3，將步驟2獲得的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞中；

步驟4，將步驟3獲得的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使其自誘導(dǎo)表達(dá)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2具體可以包括步驟2-1和步驟2-2：

步驟2-1，將步驟1獲得的分泌表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至制備好的DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，所述DH5α感受態(tài)細(xì)胞為由大腸桿菌DH5α菌株制備的感受態(tài)細(xì)胞；

步驟2-2，由步驟2-1制備的體系中挑取多組單克隆轉(zhuǎn)化子，并對(duì)所挑取的間克隆轉(zhuǎn)化子分別進(jìn)行質(zhì)粒抽提。

7.一種根據(jù)權(quán)利要求5或6所述方法制備的CA125蛋白。

8.一種檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒包括權(quán)利要求7所述CA125蛋白。

9.權(quán)利要求7所述CA125蛋白和/或權(quán)利要求1所述編碼基因用于制備CA125蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用。