[發明專利]表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒和制備方法在審
| 申請號： | 202011061204.8 | 申請日： | 2020-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN112143713A | 公開（公告）日： | 2020-12-29 |
| 發明（設計）人： | 趙攀登;呂玉金;張曉戰;井匯源;吳玉臣 | 申請（專利權）人： | 河南牧業經濟學院 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/861;C12R1/93 |
| 代理公司： | 鄭州知己知識產權代理有限公司 41132 | 代理人： | 季發軍 |
| 地址： | 450046 河南省鄭州*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表達 冠狀病毒 s1 基因 重組 病毒 制備 方法 | ||
1.表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒，其特征在于：所述重組腺病毒包含豬δ冠狀病毒S1基因，所述重組腺病毒感染AD293細胞后能夠穩定表達豬δ冠狀病毒S1蛋白。
2.根據權利要求1所述的表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒，其特征在于，所述豬δ冠狀病毒S1基因的序列如S1EQ ID NO.1所示，所述豬δ冠狀病毒S1蛋白的序列如S1EQ IDNO.2所示.
根據權利要求1或2所述的表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、獲取豬δ冠狀病毒的總RNA；
S2、反轉錄S1基因并進行鑒定；
S3、獲取S1基因的cDNA模板；
S4、設計引物，擴增S1基因并純化回收；
S4、構建pDC315/S1重組質粒；
S5、擴增S4獲得的pDC315/S1重組質粒；
S6、將S5獲得的pDC315/S1重組質粒進行病毒包裝，獲得含有pDC315/S1重組質粒的重組腺病毒。
3.根據權利要求3所述的表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒的制備方法，其特征在于，步驟S11中，鑒定含有轉錄S1基因的RNA的步驟包括：
1）設計鑒定引物，所述鑒定引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物為PDCoV-S1-pF1，參見S1EQ ID NO.3，所述下游引物為PDCoV-S1-pR1，參見S1EQ ID NO.4；
2）反轉錄并擴增總RNA；
3）跑膠，觀測目的條帶。
4.根據權利要求3所述的表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒的制備方法，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物為PDCoV-S1-F，參見SEQ ID NO.5，所述下游引物為PDCoV-S1-R，參見SEQ ID NO.6。
5.根據權利要求3所述的表達豬δ冠狀病毒S1基因的重組腺病毒的制備方法，其特征在于，還包括：
S7、將步驟S16獲得的重組腺病毒感染AD293細胞，鑒定S1蛋白的表達情況。
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