[發明專利]一種L-薄荷醇產量提高的重組酵母菌

有效

• 申請號: 202011060996.7
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112175849B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;于文文;馬駿;房峻
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N9/88;C12N9/02;C12N9/04;C12N9/90;C12N15/53;C12N15/60;C12N15/61;C12P7/02;C12R1/865
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種L-薄荷醇產量提高的重組酵母菌，其特征在于，所述的重組酵母菌是以產L-薄荷醇的基因工程菌為出發菌株，表達了法尼基焦磷酸合酶突變體基因ERG20WW和/或橙花二磷酸合酶基因NPPS，所述的產L-薄荷醇的基因工程菌是以釀酒酵母CEN.PK2–1C為宿主，過表達內源MVA合成途徑中的甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因IDI和截短的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因tHMG1，并異源表達截短的檸檬烯合成酶基因LIS、檸檬烯羥基化酶基因L3H、細胞色素P450還原酶基因CPR、反式異胡椒醇脫氫酶基因IPDH、異薄荷二烯酮還原酶基因IPR、類固醇異構酶基因KSI、長葉薄荷酮還原酶基因PGR和薄荷醇還原酶基因MMR；

其中，截短的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶是將3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶前530個氨基酸序列刪除得到，截短的檸檬烯合成酶是將檸檬烯合成酶前56個氨基酸序列刪除得到；

所述的甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶的NCBI編號是NP_015208.1，所述的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的NCBI編號是NP_013636.1，檸檬烯合成酶的NCBI編號是AAC37366.1，檸檬烯羥基化酶的NCBI編號是AAD44151.1，細胞色素P450還原酶的NCBI編號是ABB88839.2，反式異胡椒醇脫氫酶的NCBI編號是AAU20370.1，異薄荷二烯酮還原酶的NCBI編號是AAQ75422.1，類固醇異構酶的NCBI編號是AFY18860.1，長葉薄荷酮還原酶的NCBI編號是AAQ75423.1，薄荷醇還原酶的NCBI編號是AAQ55960.1；

所述的法尼基焦磷酸合酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的橙花二磷酸合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的重組酵母菌，其特征在于，所述的法尼基焦磷酸合酶突變體基因ERG20WW和/或橙花二磷酸合酶基因NPPS通過誘導型啟動子進行表達。

3.根據權利要求1所述的重組酵母菌，其特征在于，所述的重組酵母菌還過表達了檸檬烯羥基化酶基因L3H。

4.根據權利要求3所述的重組酵母菌，其特征在于，所述的檸檬烯羥基化酶基因L3H通過誘導型啟動子進行表達。

5.根據權利要求1所述的重組酵母菌，其特征在于，所述的重組酵母菌還過表達了檸檬烯合成酶和檸檬烯羥基化酶的融合蛋白基因。

6.根據權利要求5所述的重組酵母菌，其特征在于，所述的融合蛋白基因通過誘導型啟動子進行表達。

7.權利要求1-6任一項所述的重組酵母菌在發酵生產L-薄荷醇中的應用。