[發(fā)明專利]一種解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液中抗菌脂肽的分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011060014.4
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112079899B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田露;王旭陽;劉榮杰;龔國利
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/34
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種從菌體發(fā)酵液中分離抗菌脂肽的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)去除發(fā)酵液中的菌體，得到發(fā)酵清液；所述發(fā)酵液采用的發(fā)酵菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株；

2)使發(fā)酵清液在加熱和機械作用下產(chǎn)生泡沫，并將產(chǎn)生的泡沫分離，將分離的泡沫冷卻直至由該泡沫生成無泡清液；

所述步驟2)具體包括以下步驟：在溫度為37～45℃、壓力為0.08～0.09MPa，以及轉(zhuǎn)速為100～150rpm的條件下使旋轉(zhuǎn)容器內(nèi)的發(fā)酵清液產(chǎn)生泡沫并收集泡沫；將收集的泡沫于4～10℃下靜置10～30min；

3)調(diào)節(jié)無泡清液的pH值為酸性后靜置；然后分離生成的沉淀物；

4)將沉淀物用醇類溶劑進行抽提，然后過濾，得到濾液；

5)將濾液濃縮后干燥，得到脂肽成品，脂肽成品中含有Surfactin和Fengycin兩個家族的脂肽化合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種從菌體發(fā)酵液中分離抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步驟1)具體包括以下步驟：通過離心分離發(fā)酵液中的菌體后收集上清液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種從菌體發(fā)酵液中分離抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述菌株的發(fā)酵條件為：于≤48℃的溫度下振蕩培養(yǎng)≥12h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種從菌體發(fā)酵液中分離抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步驟3)中，使用4～6mo1/L HCL調(diào)節(jié)無泡清液的pH值至1.5～2.5；靜置溫度為4～10℃，靜置時間為8～12h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種從菌體發(fā)酵液中分離抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步驟4)中，用發(fā)酵液體積5‰～10‰的甲醇或乙醇溶解沉淀物后抽提2～3h，過濾采用0.2～0.22μm的有機濾膜。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種從菌體發(fā)酵液中分離抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步驟5)具體包括以下步驟：將濾液蒸干后用發(fā)酵液體積5‰～10‰的水重新溶解，然后在-20℃～-80℃預(yù)凍1～2h后真空冷凍干燥。