[發明專利]一種測定血清中乙酰膽堿酯酶含量的方法

在審

• 申請號: 202011057222.9
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112213421A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 全東琴;王永安;張亞丹;申遼;王濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 崔婧;劉海羅

本發明屬于檢測分析領域，具體涉及一種測定血清中乙酰膽堿酯酶含量的方法，包括：(1)將血清與乙酰膽堿或其鹽在28℃～45℃于反應介質中反應5～120分鐘，終止反應，固液分離，收集液相物；血清與乙酰膽堿或其鹽的比例為1:(2～35)L/mmol；(2)用液相色譜分別檢測液相物和空白樣品中的乙酰膽堿，得到第一峰面積和第二峰面積；液相色譜的色譜柱為C18色譜柱；液相色譜的流動相：含2～20mM正庚烷磺酸鈉和0.05％(v/v)～0.5％(v/v)三氟醋酸的水溶液，乙腈；(3)根據第二峰面積與第一峰面積之差通過外標分析法計算得到血清中乙酰膽堿酯酶含量。本發明方法檢測精度高、重復性好、準確度高。

技術領域

本發明屬于檢測分析領域，具體涉及一種測定血清中乙酰膽堿酯酶含量的方法。

背景技術

乙酰膽堿酯酶(AChE)是廣泛分布在中樞及外周神經系統的一種關鍵酶，能快速水解神經遞質—乙酰膽堿(ACh)，減弱ACh對突觸后膜的興奮作用，從而維持體內神經遞質的正常傳遞。但是，一旦AChE抑制劑(例如神經毒劑或有機磷農藥)侵入中樞或外周神經系統，其能夠快速抑制AChE，從而使得ACh不能被及時水解而在突觸間隙大量蓄積，嚴重威脅著生命安全。因此，AChE的含量及活性對于維持人體正常生理功能至關重要。

國內外檢測AChE的方法主要包括Ellman法、熒光法、分光光度法、化學發光法及電化學法等。Ellman法是目前應用最廣泛的檢測方法，但其檢測精度較差，在AChE測定方面有一定的局限性。

因此，目前亟需一種檢測精度高、重復性好、準確度高的測定乙酰膽堿酯酶含量的方法。

發明內容

本發明目的之一在于提供一種測定血清中乙酰膽堿酯酶含量的方法，該方法采用特定的液相色譜條件檢測，并根據空白樣品和待測樣品中乙酰膽堿或其鹽的色譜峰面積之差計算出血清中乙酰膽堿酯酶含量，其檢測精度高、重復性好、準確度高。

為實現上述發明目的，本發明涉及一種測定血清中乙酰膽堿酯酶含量的方法，包括如下步驟：

(1)將血清與乙酰膽堿或其鹽在28℃～45℃(例如30℃、35℃、37℃、40℃)于反應介質中反應5～120分鐘(例如10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、110分鐘)，終止反應，然后固液分離，收集液相物；其中，血清與乙酰膽堿或其鹽的比例為1L血清:(2～35)mmol乙酰膽堿或其鹽，例如1:5L/mmol、1:10L/mmol、1:15L/mmol、1:20L/mmol、1:25L/mmol、1:30L/mmol；

(2)采用液相色譜分別檢測液相物和空白樣品中的乙酰膽堿，分別得到第一峰面積和第二峰面積；其中，液相色譜的色譜柱為C18色譜柱(例如資生堂C18色譜柱)；液相色譜的流動相：水相為含2～20mM(例如5mM、10mM、15mM)正庚烷磺酸鈉和0.05％(v/v)～0.5％(v/v)(例如0.1％(v/v)、0.12％(v/v)、0.2％(v/v)、0.3％(v/v)、0.4％(v/v))三氟醋酸的水溶液，有機相為乙腈；以步驟(1)中反應介質等體積地替代步驟(1)中血清，其余與步驟(1)中相同，收集的液相物為所述空白樣品；

(3)根據第二峰面積與第一峰面積之差通過外標分析法計算得到血清中乙酰膽堿酯酶含量。

本發明一些實施方式中，步驟(3)中，外標分析法利用標準曲線進行計算，其中，所述標準曲線通過如下的步驟建立：