[發(fā)明專利]根癌農(nóng)桿菌的微滴數(shù)字PCR檢測引物探針組、試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011056966.9
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112126697B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 武瑤;王莉;蘇鸓;崔璇;王忠勤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發(fā)明涉及根癌農(nóng)桿菌檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及根癌農(nóng)桿菌的微滴數(shù)字PCR檢測引物探針組、試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明提供根癌農(nóng)桿菌的微滴數(shù)字PCR檢測引物探針組，其包括序列如SEQ ID NO.2?3所示的引物對和序列如SEQ ID NO.4所示的探針。本發(fā)明根據(jù)根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的VirD2基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針，該引物和探針具有較高的特異性，擴(kuò)增的線性相關(guān)良好，靈敏度高，可應(yīng)用于實際植物樣本的定量檢測，準(zhǔn)確性高，為植物冠癭病的早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)防和治療提供高效的絕對定量檢測方法，具有重要的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及根癌農(nóng)桿菌檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及根癌農(nóng)桿菌的微滴數(shù)字PCR檢測引物探針組、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)是一種植物病原細(xì)菌，屬于革蘭氏陰性菌，寄主范圍廣泛，包括絕大多數(shù)的雙子葉植物和少數(shù)的單子葉植物。根癌農(nóng)桿菌侵染可引起植物的冠癭病，嚴(yán)重時導(dǎo)致植物死亡(Pacurar,D.I.；Thordal-Christensen H.；Pacurar M.L.；Pamfil, D.；Botez,C.；Bellini,C.；Agrobacterium tumefaciens:Fromcrown gall tumors to genetic transformation.Physiological and Molecular PlantPathology.2011,76(2),76-81)。

根癌農(nóng)桿菌含有一個200-250kb的Ti質(zhì)粒，在侵染致病過程中起到?jīng)Q定性的作用(Gordon,Jay E.；Christie,Peter J.The Agrobacterium Ti Plasmids.MicrobiolSpectr.2014,2(6),1-29)。Ti質(zhì)粒上的一段 T-DNA序列所攜帶的致瘤相關(guān)基因可以被任何外源基因所替代轉(zhuǎn)入到宿主細(xì)胞中，因此根癌農(nóng)桿菌作為植物轉(zhuǎn)基因的重要工具菌被廣泛應(yīng)用(McCullen,Colleen A.；Binns,Andrew N.Agrobacterium tumefaciens and PlantCell Interactions and Activities Required for Interkingdom MacromolecularTransfer.Annual Review of Cell and Developmental Biology.2006,22,101-127)。