[發明專利]一種新冠病毒檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202011056732.4
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112048574A
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 韓亞平;柴旭陽;臧百盛;張淼;顧城瑋
• 申請（專利權）人: 北京吉檢醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京艾格律詩專利代理有限公司 11924
• 代理人: 謝毅

本發明提供了一種新冠病毒檢測試劑盒及其檢測方法，屬于分子生物學檢測技術領域。本發明重新設計了一系列檢測新型冠狀病毒的引物探針組，對現有檢測方法進行了改進，進一步增加檢測靶點，從而增加了對新型冠狀病毒的檢測靈敏度，尤其針對低拷貝數樣本的檢測，可以顯著減少假陰性結果，有效提高檢測實現靈敏度和準確度，高效率、高特異性、低成本檢測。可用于體外定性檢測新型冠狀病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要進行新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者的鼻咽拭子、痰液等樣本中的新型冠狀病毒基因。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種新冠病毒檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

2019新型冠狀病毒(COVID-19)屬于乙型冠狀病毒屬病毒，是人類歷史上確定的第7種可感染人的冠狀病毒(HCoV)，其基因特征與SARS-CoV和MERS-CoV有明顯區別。2020年2月11日，國際病毒分類委員會(ICTV)宣布，2019新型冠狀病毒的分類名為嚴重急性呼吸綜合證冠狀病毒2(SARS-Cov-2)，同日世界衛生組織(WHO)將這一病毒感染導致的疾病正式命名為COVID-19。2019新型冠狀病毒肺炎主要經飛沫、接觸傳播，人群普遍易感。2019新型冠狀病毒感染的一般癥狀有：發熱、乏力、干咳，逐漸出現呼吸困難，部分患者起病癥狀輕微，甚至可無明顯發熱。嚴重癥狀有：急性呼吸窘迫綜合征、膿毒性休克、難以糾正的代謝性酸中毒、出凝血功能障礙。除上述癥狀，還有可能具有如下不典型癥狀：如輕度納差、乏力、惡心嘔吐、腹瀉、頭痛等。從目前的收治的病例情況看，多數患者預后良好，少數患者病情危重，甚至與其它基礎性疾病并發導致死亡。因此及時、準確檢測該新型冠狀病毒十分重要。

目前檢測新型冠狀病毒COVID-19的PCR檢測試劑盒市面上已有銷售，但是對于COVID-19檢測的靈敏度、準確度(比如減少假陰性等)等方面需要進一步提高。目前主流新冠檢測試劑盒使用的是國家疾病預防控制中心新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南中推薦的核酸檢測方案。在實際的應用過程中出現了大量的假陰性和大量復陽的情況，而后國家改變了新冠確診的標準即使核酸檢測結果為陰性也可根據臨床癥狀進行確診。同時在出院的標準上要進行三次核酸檢測均為陰性才可出院。這都反應了目前引物探針檢測的靈敏度和準確性都有待提高。

發明內容

針對上述不足，本發明重新設計了一系列檢測新型冠狀病毒的引物探針組，對現有檢測方法進行了改進，進一步增加檢測靶點，從而增加了對新型冠狀病毒的檢測靈敏度，尤其針對低拷貝數樣本的檢測，可以顯著減少假陰性結果，有效提高檢測實現靈敏度和準確度，高效率、高特異性、低成本檢測。可用于體外定性檢測新型冠狀病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要進行新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者的鼻咽拭子、痰液等樣本中的新型冠狀病毒基因。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種用于檢測新型冠狀病毒基因的引物探針組，包括用于檢測ORF1ab基因的引物探針組Covid-19 A、用于檢測N基因的引物探針組Covid-19 B和用于檢測E基因的引物探針組Covid-19 C中的至少一種。所述用于檢測新型冠狀病毒基因的引物探針組，可用于在同一反應體系或單獨體系內檢測新型冠狀病毒，全新設計優化的引物探針組可盡量避免發卡結構、引物內部二聚體、引物間二聚體以及錯配的形成且能夠避免與其他病毒或人類基因發生非特異結合，從而提高檢測的準確性和可靠性，防止漏檢。

作為可選方式，在上述用于檢測新型冠狀病毒基因的引物探針組中，所述用于檢測ORF1ab基因的引物探針組包括引物ORF1ab-F和ORF1ab-R以及檢測用探針ORF1ab-P；所述用于檢測N基因的引物探針組包括引物N-F和N-R以及檢測用探針N-P；所述用于檢測E基因的引物探針組包括引物E-F和E-R以及檢測用探針E-P。本發明針對不同靶點設計了與推薦標準完全不同的全新的引物探針，在實際樣品測試中，與推薦標準中的引物探針進行比較檢出了更多的陽性樣本。