[發明專利]D-二聚體測定試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202011055793.9
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112213498A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 師冰洋;吳海剛;席國磊;張永歡;師曉兵
• 申請（專利權）人: 河南邁達斯實業有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

1.一種D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，所述D-二聚體測定試劑盒包括D-二聚體R1試劑和D-二聚體R2試劑；

所述D-二聚體R1試劑包括緩沖溶液、促凝劑和防腐劑；

所述D-二聚體R2試劑包括鼠抗人D-二聚體單克隆抗體膠乳顆粒、緩沖溶液、穩定劑和防腐劑；

所述鼠抗人D-二聚體單克隆抗體膠乳顆粒由鼠抗人D-二聚體單克隆抗體結合至6-氨基己酸修飾的聚苯乙烯膠乳顆粒制備得到；

所述6-氨基己酸修飾的聚苯乙烯膠乳顆粒通過如下方法制備：

將預處理后的聚苯乙烯膠乳顆粒經6-氨基己酸的PBST溶液溶解，反應后固液分離，得到所述經6-氨基己酸修飾的聚苯乙烯膠乳顆粒；

其中，所述PBST的pH為8.0-9.0。

2.根據權利要求1所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，所述預處理包括向MES溶液中加入聚苯乙烯膠乳顆粒水溶液，然后再依次加入EDC溶液和NHS溶液，混合反應后，固液分離得到預處理后的聚苯乙烯膠乳顆粒；

優選地，用MES溶液配制濃度為100mg/ml的EDC溶液；

優選地，用MES溶液配制濃度為100mg/ml的NHS溶液；

優選地，所述MES溶液的pH為6.0，濃度為0.1M；

優選地，所述聚苯乙烯膠乳顆粒水溶液的濃度為10mg/ml。

3.根據權利要求2所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，向5ml0.1M的MES溶液中加入400ul濃度為10mg/ml的聚苯乙烯膠乳顆粒水溶液，然后依次加入100ul EDC溶液和72ul的NHS溶液，室溫下攪拌2小時；反應結束后3500rpm離心洗滌；最后用5ml濃度為100mM/l的6-氨基己酸的PBST溶液復溶，然后室溫下攪拌過夜；反應結束后12000rpm離心洗滌，最后用5ml的0.1M的MES溶液分散，得到所述經6-氨基己酸修飾的聚苯乙烯膠乳顆粒。

4.根據權利要求1-3任一項所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，將鼠抗人D-二聚體單克隆抗體加入到活化后的6-氨基己酸修飾的聚苯乙烯膠乳顆粒的PBST溶液中，得到鼠抗人D-二聚體單克隆抗體膠乳顆粒；

所述PBST的pH為7.0-7.4。

5.根據權利要求4所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，將6-氨基己酸修飾的聚苯乙烯膠乳顆粒加入100ul EDC溶液，然后再加入72ul的NHS溶液，室溫下攪拌2小時，進行活化，反應結束后12000rpm離心洗滌后分散在2ml PBST中，然后將26ul鼠抗人D-二聚體單克隆抗體用2ml PBST稀釋，然后逐滴加入微球溶液中，得到鼠抗人D-二聚體單克隆抗體膠乳顆粒。

6.根據權利要求1所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，所述D-二聚體R1試劑中的緩沖溶液包括PBS緩沖溶液；

優選地，所述D-二聚體R1試劑中的促凝劑包括PEG8000。

7.根據權利要求1所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，所述D-二聚體R2試劑中的緩沖溶液包括PBS緩沖溶液，優選為pH為7.4的PBS緩沖溶液；

優選地，所述D-二聚體R2試劑中的穩定劑包括0.3wt％BSA、100mM甘氨酸和0.3wt％吐溫40；

優選地，所述D-二聚體R1試劑和述D-二聚體R2試劑中的防腐劑包括Proclin-300；

優選地，所述D-二聚體R2試劑中鼠抗人D-二聚體單克隆抗體膠乳顆粒的濃度為2-6mg/mL。

8.根據權利要求1所述的D-二聚體測定試劑盒，其特征在于，所述聚苯乙烯膠乳顆粒是一種核殼形式的膠乳，乳核是苯乙烯聚合物，乳殼是苯乙烯，丙烯酸正丁酯，甲基丙烯酸形成的共聚物。