[發明專利]一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法

在審

• 申請號: 202011055628.3
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112179859A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 安文琪;趙云霞;王斌;江魁;畢利利;王園園
• 申請（專利權）人: 華蘭基因工程有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法，包括如下步驟：

(1)配置雙光徑免疫濁度分析儀的沖洗液；

所述雙光徑免疫濁度分析儀的沖洗液由包括3-環己胺-2-羥基丙磺酸(CAPSO)配置而成；

(2)采用所述沖洗液沖洗雙光徑免疫濁度分析儀，然后用其測定至少4個不同濃度的所述肺炎球菌多糖標準品溶液的吸光度，檢測時所述肺炎球菌多糖標準品溶液放置在樣本區、血清加入UDR試劑盒后放在試劑區；以所述吸光度為縱坐標，以所述肺炎球菌多糖標準品溶液的濃度為橫坐標，建立所述肺炎球菌多糖標準品溶液的標準曲線；

(3)在步驟(2)相同的條件下，測定待測樣品溶液的吸光度，檢測時所述待測樣品溶液放置在樣本區、血清加入UDR試劑盒后放在試劑區；采用步驟(2)中所述標準曲線計算，得到所述待測樣品溶液中肺炎球菌多糖的濃度，以得到待測樣品中肺炎球菌多糖的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述雙光徑免疫濁度分析儀的型號為IMMAGE 800；

所述沖洗液由包括NaCl、所述3-環己胺-2-羥基丙磺酸(CAPSO)和NaoH配置而成。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：配制的1000ml所述沖洗液中，所述NaCl的用量為4～5g；所述3-環己胺-2-羥基丙磺酸的用量為2～3g，所述NaoH的含量調pH值為8.0～10.5。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于：步驟(2)和(3)中測定吸光度采用的波長為530～670nm。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于：步驟(2)和(3)中測定吸光度采用的檢測模式為速率散射模式。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于：步驟(2)和(3)中測定吸光度采用的光源為激光光源。

所述肺炎球菌多糖標準品溶液的濃度范圍是1.25～25μg/ml。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于：采用所述雙光徑免疫濁度分析儀檢測吸光度的方法，包括如下步驟：1)打開所述雙光徑免疫濁度分析儀，采用所述沖洗液沖洗反應杯；

2)裝載貝克曼自帶緩沖液和載貝克曼自帶稀釋液；

3)在所述雙光徑免疫濁度分析儀的自定義主界面選擇所述檢測模式，設定所述肺炎球菌多糖標準品、血清、所述貝克曼自帶緩沖液進樣體積，增益系數以及反應時間；

4)裝載不同濃度的所述肺炎球菌多糖標準品溶液與其相應的血清試劑，請求定標；

5)以不同濃度的肺炎球菌多糖標準品與其相應的吸光度在所述雙光徑免疫濁度分析儀上建立標準曲線；

6)在所述雙光徑免疫濁度分析儀上手動編輯所述待測樣品的架子號、位置號、樣品標號、進行檢測；

7)在主屏幕下，選擇結果Results，輸入相關查詢的架子號、樣品標號，按F1顯示結果(Display Results)，即得到所述待測樣品中肺炎球菌多糖的含量。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：步驟3)中，設定的所述肺炎球菌多糖標準品進樣體積為10～25μl；

所述血清進樣體積為10～25μl；

所述緩沖液進樣體積為200～300μl；

所述增益系數值為1～4；

所述反應時間為1～5min。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于：步驟5)中，所述標準曲線R≥0.98～0.99。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其特征在于：所述方法適用所述待測樣品包括23個血清型的肺炎鏈球菌多糖疫苗里每型別多糖的定量檢測。