[發明專利]一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法

在審

• 申請號: 202011055628.3
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112179859A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 安文琪;趙云霞;王斌;江魁;畢利利;王園園
• 申請（專利權）人: 華蘭基因工程有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法。包括如下步驟：(1)配置雙光徑免疫濁度分析儀的沖洗液；雙光徑免疫濁度分析儀的沖洗液由包括3?環己胺?2?羥基丙磺酸配置而成；(2)采用沖洗液沖洗雙光徑免疫濁度分析儀，然后用其測定至少4個不同濃度的肺炎球菌多糖標準品溶液的吸光度；以肺炎球菌多糖標準品溶液的吸光度、濃度，建立肺炎球菌多糖標準品溶液的標準曲線；(3)在步驟(2)相同的條件下，測定待測樣品溶液的吸光度；采用步驟(2)中標準曲線計算，得到待測樣品溶液中肺炎球菌多糖的濃度，以得到待測樣品中肺炎球菌多糖的含量。本發明克服了普通化學檢測方法無法準確區分各型肺炎球菌多糖的困難，同時降低試驗成本。

技術領域

本發明涉及一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法，屬于藥物分析領域。

背景技術

肺炎鏈球菌在呼吸道的感染可引起支氣管炎、肺炎、中耳炎、鼻竇炎等疾病，如果肺炎鏈球菌侵入血液則會引起腦膜炎、敗血癥等更為嚴重的疾病。肺炎鏈球菌始終是導致兒童腦膜炎、菌血癥、肺炎等嚴重疾病的首位病原菌，是引起鼻竇炎和急性中耳炎的最常見病因。迄今為止，23個血清型的肺炎鏈球菌多糖疫苗已經研制成功，在23價肺炎球菌多糖疫苗成品指控項目中，23價肺炎球菌多糖含量是疫苗的重要檢測指標。

速率散射濁度法(LSR)則是測定各型肺炎多糖含量的主要方法。因為利用了抗原抗體的特異性反應，所以可以準確地檢測23價肺炎多精疫苗中各型多糖的含量。不同于普通化學檢測方法無法準確區分各型肺炎球菌多糖，該方法更為精確，并有較高的靈敏度。

發明內容

本發明的目的是提供一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法。

本發明提供的一種定量檢測肺炎球菌多糖含量的免疫學檢測方法，包括如下步驟：

(1)配置雙光徑免疫濁度分析儀的沖洗液；

所述雙光徑免疫濁度分析儀的沖洗液由包括3-環己胺-2-羥基丙磺酸(CAPSO)配置而成；

(2)采用所述沖洗液沖洗雙光徑免疫濁度分析儀，然后用其測定至少4個不同濃度的所述肺炎球菌多糖標準品溶液的吸光度，檢測時所述肺炎球菌多糖標準品溶液放置在樣本區、血清加入UDR試劑盒后放在試劑區；以所述吸光度為縱坐標，以所述肺炎球菌多糖標準品溶液的濃度為橫坐標，建立所述肺炎球菌多糖標準品溶液的標準曲線；

(3)在步驟(2)相同的條件下，測定待測樣品溶液的吸光度，檢測時所述待測樣品溶液放置在樣本區、血清加入UDR試劑盒后放在試劑區；采用步驟(2)中所述標準曲線計算，得到所述待測樣品溶液中肺炎球菌多糖的濃度，以得到待測樣品中肺炎球菌多糖的含量。

本發明中，所用肺炎球菌多糖標準品可購自丹麥國立血清研究所。

上述的方法中，所述雙光徑免疫濁度分析儀的型號為IMMAGE 800；

所述沖洗液由包括NaCl、所述3-環己胺-2-羥基丙磺酸(CAPSO)和NaoH配置而成。進一步的，根據所述沖洗液使用限期，還可以加入防腐劑。具體的，所述實驗所用洗液為現用現配，無需加防腐劑。

上述的方法中，配制的1000ml所述沖洗液中，所述NaCl的用量為4～5g；所述3-環己胺-2-羥基丙磺酸的用量為2～3g，所述NaoH的含量調pH值為8.0～10.5，具體可為10.2。

上述的方法中，步驟(2)和(3)中測定吸光度采用的波長為530～670nm，具體可為670nm，90度檢測角。

上述的方法中，步驟(2)和(3)中測定吸光度采用的檢測模式為速率散射模式。

上述的方法中，步驟(2)和(3)中測定吸光度采用的光源為激光光源。