[發(fā)明專利]一種環(huán)瓜氨酸肽雙微球偶聯(lián)物及其制備方法與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011055170.1
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112495319B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 石懷興;溫志國
• 申請（專利權）人: 海豐生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: B01J13/14
• 分類號: B01J13/14;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/546;G01N33/543
• 代理公司: 北京華清迪源知識產(chǎn)權代理有限公司 11577
• 代理人: 彭伶俐

1.一種環(huán)瓜氨酸肽雙微球偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟一、羧基膠乳微球活化

向20mL?0.05M?pH?6.5的MES緩沖液中加入1mL直徑為120nm的10％聚苯乙烯膠乳微球，然后加入5mL濃度為1mg/mL的碳化二亞胺水溶液，室溫攪拌活化30min，得到活化后的聚苯乙烯膠乳微球；

步驟二、羧基微球與環(huán)瓜氨酸肽偶聯(lián)

將5mg環(huán)瓜氨酸肽，用50mL，0.05M?pH8.0的MOPS緩沖液稀釋，混合均勻，倒入所述活化后的聚苯乙烯膠乳微球膠乳液，室溫攪拌0.5h，得到含羧基微球與環(huán)瓜氨酸肽偶聯(lián)物的溶液；

步驟三、氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的制備

將0.5mL?10％的氨基膠乳微球加入到10mL?0.01％的BSA溶液中，混合均勻后，倒入到所述含羧基微球與環(huán)瓜氨酸肽偶聯(lián)物的溶液中，室溫繼續(xù)攪拌3h，得到含氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的溶液；

步驟四、封閉氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物

向所述含氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的溶液中加入2mL?5％BSA攪拌1h，終止反應，得到含穩(wěn)定的氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的溶液；

步驟五、氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物分離

對所述含穩(wěn)定的氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的溶液離心分離、清洗，用50mL?50mM?pH8.0的MOPS緩沖液洗滌，離心棄去上清，洗滌3次；

步驟六、氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的保存

用保存緩沖液重懸膠乳顆粒使之分散，然后，使用超聲粉碎機將其充分分散成穩(wěn)定的氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的白色膠乳懸浮液，氨基微球-環(huán)瓜氨酸肽-羧基微球偶聯(lián)物的終濃度為0.2％。

2.權利要求1所述的方法制備得到的環(huán)瓜氨酸肽雙微球偶聯(lián)物。

3.權利要求2所述的環(huán)瓜氨酸肽雙微球偶聯(lián)物在如下任一應用，

(a)制備結合或分離抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的產(chǎn)品；

(b)制備檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的產(chǎn)品；

(c)制備用于診斷類風濕關節(jié)炎的產(chǎn)品。