[發(fā)明專利]檢測血液中阿米替林和去甲替林含量的方法

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• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN111983114A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設計）人: 邱天祎;賈永娟;倪君君
• 申請（專利權(quán)）人: 濟南和合醫(yī)學檢驗有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 濟南信達專利事務所有限公司 37100
• 代理人: 李世喆

1.檢測血液中阿米替林和去甲替林含量的方法，其特征在于，包括：

利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，在一定檢測條件下，分別檢測至少三個標準溶液，得到各個標準溶液的色譜圖，其中，任一標準溶液中均含有濃度已知的阿米替林的標準品及內(nèi)標物、去甲替林的標準品及內(nèi)標物，不同標準溶液中同一標準品的濃度不同；

根據(jù)各個標準溶液的色譜圖，擬合得到阿米替林的標準曲線方程和去甲替林的標準曲線方程；

將一定量的混合內(nèi)標工作液添加到一定量的血液樣本中，混勻后再加入一定量的pH調(diào)節(jié)劑和萃取劑，混勻后離心，取上清液用氮氣吹干后加入一定量的復溶液，混勻后離心取上清液得到待測樣本；其中，所述血液樣本經(jīng)處理至少1mL待檢測血液而得到，所述混合內(nèi)標工作液中含有濃度已知的阿米替林的內(nèi)標物和去甲替林的內(nèi)標物；

利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，在相同檢測條件下檢測待測樣本，得到待測樣本的色譜圖；

根據(jù)待測樣本的色譜圖和擬合得到的各個標準曲線方程，計算血液樣本中阿米替林和去甲替林的含量；

其中，所述檢測條件中的液相條件包括：Agilent Poroshell 120SB-C18色譜柱，色譜柱的長度為50mm、內(nèi)徑為3.0mm、填料粒徑為2.7μm，流動相A為含0.4％甲酸和5mM乙酸銨的水溶液，流動相B為含0.4％甲酸和5mM乙酸銨的甲醇溶液，洗脫過程采用等度洗脫的方式，分析時間為1.5-4min，柱溫為25-45℃，流速為0.10-1.00mL/min，進樣量為0.1-5μL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀為Waters ACQUITY UPLC I-Class IVD/Xevo TQD IVD儀器。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

分析時間為1.6min，流速為0.30mL/min，柱溫為35℃，進樣量為1μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，

流動相A和流動相B的體積比為20:80。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述檢測條件中的質(zhì)譜條件包括：ESI(+)檢測模式，采集模式為MRM，離子源溫度為90-150℃，毛細管電壓為2-3.5kV，錐孔電壓為10-60V，去溶劑氣溫度為300-500℃，去溶劑氣流速為200-800L/Hr，二級錐孔萃取電壓為3-10V，碰撞室進口電壓為1-30V，碰撞室出口電壓為1-30V。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，

離子源溫度為110℃，毛細管電壓為3.5kV，錐孔電壓為24V，去溶劑氣溫度為430℃，去溶劑氣流速為400L/Hr，二級錐孔萃取電壓為3V，碰撞室進口電壓為30V，碰撞室出口電壓為30V。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述將一定量的混合內(nèi)標工作液添加到一定量的血液樣本中，混勻后再加入一定量的pH調(diào)節(jié)劑和萃取劑，混勻后離心，取上清液用氮氣吹干后加入一定量的復溶液，混勻后離心取上清液得到待測樣本，包括：

用移液槍移取10-200μL血液樣本于1.5mL離心管中，該血液樣本為經(jīng)處理至少1mL待檢測血液而得到的血清或血漿，然后加入10μL混合內(nèi)標工作液，在1000-2500rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋震蕩混合20s-2min；

再加入1M NaOH溶液10-50μL，在1000-2500rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋震蕩混合20s-2min；

再加入甲基叔丁基醚0.5-1.2mL，在1000-2500rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋震蕩混合3-10min后，在10000-12000rpm的轉(zhuǎn)速下高速離心3-12min；

移取上清液950μL至另一個1.5mL離心管中并用氮氣吹干，然后加入100μL含0-50％水的甲醇溶液，在1000-2500rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋震蕩混合20s-2min后，在10000-12000rpm的轉(zhuǎn)速下高速離心5-12min，取上清液90μL得到待測樣本。