[發明專利]一種西曲瑞克的轉鹽方法

有效

• 申請號: 202011049766.0
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112250735B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 趙冬霞;毛影;李運鐸;朱贊梅;李沁沁;婁麗麗;劉志慶;劉美朝;常歡
• 申請（專利權）人: 開封明仁藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 李秋紅

1.一種西曲瑞克的轉鹽方法，其特征在于，所述轉鹽方法包括以下步驟：

a、將西曲瑞克粗肽制成粗肽溶液，然后采用濾膜進行過濾，收集濾液；

b、將步驟a所得濾液采用色譜柱進行反相色譜純化，收集目標峰洗脫液，得到西曲瑞克溶液；

c、將步驟b所得西曲瑞克溶液采用反滲透膜進行濃縮，得到濃縮液；采用純化水沖洗反滲透膜，收集沖洗液，將沖洗液與濃縮液混合均勻，得到西曲瑞克濃縮液；

采用反滲透膜進行濃縮時控制壓力為8～10Mpa，濃縮至原溶液體積的1/5；

d、將步驟c所得西曲瑞克濃縮液采用C18反相色譜柱進行轉鹽，轉鹽過程中依次采用兩種體系進行轉鹽，采用醋酸溶液甲醇體系進行洗脫，洗脫時在主峰出現后開始收集洗脫液，主峰完全結束后停止收集，得到西曲瑞克溶液；

所述兩種轉鹽體系過程和洗脫體系過程中檢測波長均為230nm，色譜柱均采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，柱子的直徑和長度為50mm×250mm；流速均為30ml/min；

所述兩種轉鹽體系中第一體系流動相A為0.5%的磷酸水溶液，流動相B為乙腈，置換時間為80min，水相與有機相的比例為90：10；第二體系流動相A為1%的醋酸銨水溶液，流動相B為甲醇，置換時間為60min，水相與有機相的比例為90：10；第三體系洗脫時流動相A為0.5%的醋酸水溶液，流動相B為甲醇，洗脫時間為80min，其中前40min采用等度洗脫，水相和有機相的比例為90：10，后40min采用梯度洗脫，水相由90%降至60%，有機相比例由10%升至40%；

e、將步驟d收集得到的西曲瑞克溶液采用反滲透膜進行濃縮，濃縮結束，收集濃縮液；采用純化水沖洗反滲透膜，收集沖洗液，沖洗液與濃縮液混合均勻，將混合液轉移至凍干盤中，液體高度控制在2cm以下，放入凍干機進行凍干，得到西曲瑞克醋酸鹽成品。

2.根據權利要求1所述的西曲瑞克的轉鹽方法，其特征在于：步驟a中所述粗肽溶液是將西曲瑞克粗肽采用流動相溶解所得；所述流動相是由0.1%的三氟乙酸水溶液和含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液混合而成，所述0.1%的三氟乙酸水溶液與含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液混合時二者之間的體積比為90：10；所述粗肽與流動相二者之間的質量體積比為1g：25～50ml。

3.根據權利要求1所述的西曲瑞克的轉鹽方法，其特征在于：步驟a中所述濾膜為0.45μm的水系濾膜。

4.根據權利要求1所述的西曲瑞克的轉鹽方法，其特征在于：步驟b中反相色譜純化過程中采用的制備柱為C18色譜柱，色譜柱的直徑和長度為50mm×250mm；色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，固定相的粒度為10μm；檢測波長為230nm，流動相A為0.1%的三氟乙酸水溶液，流動相B為含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液；流速為30ml/min；梯度洗脫條件為60min內有機相由5%增加至40%，水相由95%降至60%。

5.根據權利要求1所述的西曲瑞克的轉鹽方法，其特征在于：步驟e中采用反滲透膜進行濃縮時控制壓力為8～10Mpa，濃縮至原溶液體積的1/5。