[發明專利]一種結核分枝桿菌的重組DNA疫苗及其制備方法在審
| 申請號： | 202011047690.8 | 申請日： | 2020-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN112190701A | 公開（公告）日： | 2021-01-08 |
| 發明（設計）人： | 徐穎;翁術鋒;王洪海;趙雅敏;張天然;章金怡 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | A61K39/04 | 分類號： | A61K39/04;A61P31/06;C12N15/85;C12N15/66;C12N15/62 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 王潔平 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 結核 分枝桿菌 重組 dna 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種結核分枝桿菌的重組DNA疫苗，其特征在于，其通過將基因Ag85B、Rv2029c和Rv1738重組入真核表達載體獲得。
2.根據權利要求1所述的重組DNA疫苗，其特征在于，表達質粒為pVAX1，重組疫苗為Ag85B-Rv2029c-Rv1738-pVAX1。
3.一種如權利要求1所述的結核分枝桿菌的重組DNA疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)擴增Ag85B、Rv2029c和Rv1738基因；
(2)分別用雙酶切Ag85B基因和表達質粒，膠回收連接獲得重組質粒；
(3)將步驟(2)獲得的重組質粒轉化、擴增并表達；
(4)分別用雙酶切步驟(3)獲得的重組質粒和Rv2029c基因，膠回收連接形成重組質粒；
(5)將步驟(4)獲得的重組質粒轉化、擴增并表達；
(6)分別用雙酶切步驟(5)獲得的重組質粒和Rv1738基因，膠回收連接形成重組質粒；
(7)將步驟(6)獲得的重組質粒轉化、擴增并表達，即得到重組DNA疫苗。
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，表達質粒是pVAX1。
5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，雙酶切使用的酶是NheI和HindIII；步驟(4)中，雙酶切使用的酶是HindIII和EcoR1；步驟(6)中，雙酶切使用的酶是EcoR1和Not1。
6.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)、步驟(5)和步驟(7)中，重組質粒在大腸桿菌中轉化、擴增并表達。
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