[發明專利]用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物及方法與應用

有效

• 申請號: 202011047560.4
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112143826B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 王繼永;尚興樸;鄭司浩;曾燕;劉美娟;包芳;杜杰;梁煥;李進瞳
• 申請（專利權）人: 中國中藥有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京知聯天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11594
• 代理人: 張陸軍;張迎新

本發明涉及一種用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物及方法與應用，所述SSR分子標記引物命名為GC01，由核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的下游引物組成。使用本發明的引物可以對不同產地甘草進行鑒別，可以鑒別出新疆地區甘草和非新疆地區甘草，篩選到的引物準確度高、穩定性強，本發明的方法操作簡便，成本低廉、易于大范圍推廣應用。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物及方法與應用。

背景技術

甘草(Glycyrrhizae Radix et rhizome)為豆科(Leguminosae)甘草屬藥材，《中國藥典》規定甘草藥材植物來源為甘草、脹果甘草或光果甘草的干燥根和根莖。市場上甘草藥材以甘草(又稱烏拉爾甘草)來源為主，其產地多分布于新疆、甘肅、內蒙古等省份。

不同產地甘草的種子價格差異顯著，新疆產甘草的種子價格普遍比其他產地(如內蒙、甘肅等省份)低近一半左右，新疆地區種植的甘草藥材俗稱“大頭草”，藥材價格要低于內蒙、甘肅等省份甘草種源的藥材。這就導致在市場交易及流通過程中，新疆產甘草的種子經常混雜在其他產地的種子中進行銷售，傳統的鑒別方式多為經驗判別，主要從甘草種子的外觀形態方面進行區分，但是外觀鑒別存在很大的不確定性，很難準確區分新疆產甘草種子。因此，研發一種用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物及方法與應用具有重要意義。

發明內容

本發明為解決上述問題提供了一種用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物及方法與應用。

用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物，所述SSR分子標記引物命名為GC01，由核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的下游引物組成。

進一步地，所述引物的退火溫度為55℃-60℃之間，所述引物的長度在20-25bp之間，PCR擴增產物長度在150bp-350bp之間。

進一步地，所述方法包括以下步驟：

提取待鑒別甘草樣本的DNA；

以待鑒別甘草樣本的DNA為模板，用SSR分子標記引物進行PCR擴增；

取擴增產物進行電泳檢測。

進一步地，所述擴增反應的程序包括：

95℃預變性5min；95℃變性0.5min，60℃退火0.5min，72℃延伸0.5min，30次循環；72℃延伸10min。

進一步地，在所述電泳鑒定時，所用的凝膠為1％的瓊脂糖凝膠，電壓為140V，電泳20-30min。

本發明還涉及上述SSR分子標記引物在甘草產地鑒別中的應用。

本發明的有益效果：

本發明提供了用于鑒別甘草產地的SSR分子標記引物及方法與應用，使用本發明的引物可以對不同產地甘草進行鑒別，可以鑒別出新疆地區甘草和非新疆地區甘草，篩選到的引物準確度高、穩定性強，本發明的方法操作簡便，成本低廉、易于大范圍推廣應用。

本發明的其它特征和優點將在隨后的說明書中闡述，并且，部分地從說明書中變得顯而易見，或者通過實施本發明而了解。本發明的目的和其他優點可通過在說明書、權利要求書以及附圖中所指出的結構來實現和獲得。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作一簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是不同產地甘草的SSR特異性位點圖。