[發明專利]一種區分檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌的雙重PCR檢測引物及應用

有效

• 申請號: 202011044315.8
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112143825B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 紀春艷;敖莉絲;馮黎霞;潘汝謙;王衛芳
• 申請（專利權）人: 華南農業大學;廣州海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

1.一種用于區分檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌的雙重PCR引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～4所示。

2.權利要求1所述雙重PCR引物在檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌中的應用。

3.權利要求1所述雙重PCR引物在制備用于檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌的試劑盒中的應用。

4.一種用于檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌的雙重PCR檢測試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述雙重PCR引物。

5.根據權利要求4所述雙重PCR檢測試劑盒，其特征在于，還包括PCR反應緩沖液、dNTP和Taq DNA聚合酶。

6.權利要求4或5所述雙重PCR檢測試劑盒在區分檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌中的應用。

7.一種區分檢測花生黑腐病菌和花生基腐病菌的雙重PCR檢測方法，其特征在于，利用權利要求1所述雙重PCR引物進行雙重PCR擴增；檢測雙重PCR擴增產物，擴增獲得274 bp單一目的條帶說明待測樣本含有花生黑腐病菌，擴增獲得409 bp單一目的條帶則說明待測樣本含有花生基腐病菌，擴增獲得2條分別為274 bp和409 bp目的條帶說明待測樣本同時含有花生黑腐病菌和花生基腐病菌；

雙重PCR反應體系為：DNA模板1 μL，10×PCR Buffer 4.5 μL，2.5 mmol/L dNTP s混合液3.6 μL，5U/μL Taq聚合酶0.225 μL，0.2 μM權利要求1所述雙重PCR引物4條各0.25 μL，無菌水補足25 μL；

雙重PCR反應程序為：94℃預變性5 min，94℃變性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸30 s，共37個循環，72℃延伸7 min。