[發明專利]豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202011044308.8
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112415067A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 沈海燕;溫俊平;張春紅;勾紅潮;劉志成;張建民;廖明;張建峰
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所;嶺南現代農業科學與技術廣東省實驗室茂名分中心;華南農業大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/12;G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

本發明公開了豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器，其由：工作電極、印刷電路板微電極板、固定于印刷電路板微電極板一側表面上的結合蛋白、豬流行性腹瀉病毒特異性抗體、封閉液制備得到；其中，所述結合蛋白特異性結合所述豬流行性腹瀉病毒特異性抗體或所述封閉液。本發明制備得到的豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器特異性強，敏感性高，操作簡便，能快速完成PEDV檢測，對于疾病的現場快篩具有極高的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物傳感器領域，具體涉及豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器及其制備方法與應用。

背景技術

豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的豬的一種急性高度接觸性的豬腸道傳染病。患病豬通常會發生腹瀉、嘔吐和脫水等癥狀，對養豬業危害巨大。各種年齡段的豬均可感染，發病率較高，尤以哺乳期仔豬受害最重，給養豬業帶來巨大的經濟損失。

目前PEDV檢測方法主要包括傳統病毒分離鑒定、聚合酶鏈式反應(PCR)、實時熒光定量PCR(RT-qPCR)、酶聯免疫吸附(ELISA)、逆轉錄-環介導等溫核酸擴增技術(RT-LAMP)、免疫熒光技術、血清中和試驗(SNT)等方法。病毒分離鑒定是診斷PEDV的金標準，具有準確率高的優點，但其操作復雜，檢測時間漫長，無法實現現場快速檢測的要求。而ELISA、PCR、RT-qPCR、RT-LAMP、免疫熒光技術、SNT等方法存在特異性較差、或敏感性較低、或操作復雜繁瑣、或需要昂貴的儀器設備及專業的技術人員，難以實現PEDV在獸醫基層的快速檢測，不利于在實際使用中對PEDV疫情進行有效監控預警等不同程度的問題。

近年來，生物傳感器在病原微生物快速檢測中的應用受到國內外學者的重視，但其技術相對不成熟，尤其是對于豬流行性腹瀉病毒相關的生物傳感器，其開發程度相對較低，因此，亟待能開發出一種的有效解決現有豬流行性腹瀉病毒檢測技術缺陷的阻抗型免疫生物傳感器，以提高豬流行性腹瀉病毒檢測效率，滿足豬流行性腹瀉病毒現場快速檢測的使用需求。

發明內容

本發明的目的在于提供豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器；

本發明的另一目的在于提供上述的豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器的制備方法；

本發明的另一目的在于提供基于上述的豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器的豬流行性腹瀉病毒檢測方法；

本發明的另一目的在于提供一種豬流行性腹瀉病毒檢測設備；

本發明的另一目的在于提供上述的豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器在豬流行性腹瀉病毒快速定性檢測中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一個方面，提供：

豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器，該豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器由：工作電極、印刷電路板微電極板(PCR微電極板)、固定于印刷電路板微電極板一側表面上的結合蛋白、連接于所述結合蛋白上的豬流行性腹瀉病毒特異性抗體組成。

其中，上述豬流行性腹瀉病毒阻抗型免疫生物傳感器還包括封閉液。

上述結合蛋白特異性結合上述豬流行性腹瀉病毒特異性抗體或上述封閉液。

進一步地，上述結合蛋白可結合豬流行性病毒抗體Fc端。

本發明中的印刷電路板微電極板表面固定的特異性抗體與目標病毒之間具有良好的親和力是保證本發明中的免疫傳感器檢測性能的重要因素。