[發明專利]一種人血漿及尿液中氟乙酸濃度的快速檢測方法

有效

• 申請號: 202011040051.9
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112180009B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 海鑫;劉亮;郭美華
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務所(普通合伙) 23209
• 代理人: 趙君

1.一種人血漿中氟乙酸濃度的快速檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、確定LC-MS/MS檢測條件：

LC-MS/MS的色譜條件為：

色譜柱為HILIC色譜柱；流動相體積比為：乙腈:5mmol甲酸銨＝90:10，其中甲酸銨中含有體積濃度0.2％的甲酸；

流動相總流速0.4mL/min；進樣量20μL；柱溫為40℃；

LC-MS/MS的質譜條件為：

離子源采用ESI電噴霧離子源，掃描模式為負離子MRM掃描；

步驟二、配制標準工作液：

分別配制不同濃度的氟乙酸標準工作液和內標碘乙酸標準工作液；

步驟三、建立血漿中氟乙酸濃度標準曲線及回歸方程：

將空白血漿分別與步驟二配制的不同濃度氟乙酸標準工作液混勻，得到不同濃度的血漿氟乙酸校準樣本，按體積比分別向不同濃度血漿氟乙酸校準樣本中加入內標碘乙酸標準工作液，旋渦30s，再分別加入600μL乙腈沉淀蛋白，旋渦振蕩30s，將混勻后的樣本放入低溫離心機中4℃條件下15000r/min離心10min，取上清液用0.22μm微孔濾膜過濾得到不同濃度的血漿氟乙酸標準樣本，所得各濃度血漿氟乙酸標準樣本分別按步驟一確定的LC-MS/MS檢測條件進行檢測；

以不同濃度血漿氟乙酸峰面積與內標碘乙酸峰面積的比值為縱坐標y，以氟乙酸在血漿中的濃度為橫坐標x，得到血漿中氟乙酸濃度的標準曲線，進行直線回歸，得血漿中氟乙酸濃度的回歸方程；

步驟四、待測血漿前處理：

精密量取待測血漿200μL置于1.5mL EP管中，加入20μL步驟二配制的內標碘乙酸標準工作液，旋渦混勻后加入600μL乙腈，旋渦振蕩1min，4℃條件下15000r/min離心5min，取上清液過濾后用0.22μm微孔濾膜過濾，得到待測血漿樣本；

步驟五、待測血漿樣本檢測與數據處理：

將步驟四所得待測血漿樣本按步驟一確定的LC-MS/MS檢測條件進行檢測，由峰面積定量，保留時間定性，利用步驟三得出的回歸方程計算得出血漿中氟乙酸的濃度。

2.根據權利要求1所述一種人血漿中氟乙酸濃度的快速檢測方法，其特征在于，步驟一中LC-MS/MS的質譜條件還包括，氟乙酸的母離子：m/z＝77，定量子離子m/z＝57，定性子離子m/z＝32，碘乙酸母離子m/z＝184.8，子離子m/z＝126.8。

3.根據權利要求1或2所述一種人血漿中氟乙酸濃度的快速檢測方法，其特征在于，步驟二配制的氟乙酸標準工作液的濃度依次為2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500μg/mL和1000μg/mL；內標碘乙酸標準工作液的濃度為200μg/mL。

4.根據權利要求3所述一種人血漿中氟乙酸濃度的快速檢測方法，其特征在于，步驟三所述血漿氟乙酸校準樣本的濃度依次為0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL和100μg/mL，步驟三所述血漿氟乙酸校準樣本與內標碘乙酸標準工作液的體積比為10:1；步驟三所得血漿中氟乙酸濃度的回歸方程為y＝0.00943x+0.00936，r²＝0.9962。

5.根據權利要求4所述一種人血漿中氟乙酸濃度的快速檢測方法，其特征在于，步驟四所述待測血漿樣本與內標碘乙酸標準工作液的體積比為10:1。