[發明專利]一種司美格魯肽的純化方法

有效

• 申請號: 202011039848.7
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112175068B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 馬亞平;付信;張凌云;戴政清;王宇恩;周迎春;王慶磊
• 申請（專利權）人: 深圳深創生物藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/14
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

本發明涉及一種司美格魯肽的純化方法，其包括如下步驟：1)獲得固相合成方法制備得到的裂解樹脂以及脫除保護基的司美格魯粗肽，用含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液溶解司美格魯肽粗肽；2)取司美格魯肽粗肽溶液用0.22μm有機濾膜過濾，收集濾液備用；3)第一步純化以反相填料為固定相，用含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液為A相，乙腈為B相，進行梯度洗脫；4)第二步純化以反相填料為固定相，稀醋酸溶液為A相，乙腈為B相，進行梯度洗脫；5)將濃縮后的樣品進行冷凍干燥，獲得司美格魯肽。本發明方法以含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液溶解粗肽，溶解后的粗肽溶液pH更穩定不易析出，即避免了色譜柱和設備堵塞，又提高了分離效果。

技術領域

本發明涉及一種多肽藥物的純化技術領域，特別涉及司美格魯肽的分離純化方法，屬于藥物化學領域。

背景技術

中文名：司美格魯肽

英文名：Semaglutide

CAS號:910463-68-2

分子式:C₁₈₇H₂₉₁N₄₅O₅₉

分子量:4113.64

其結構如下:

司美格魯肽是由諾和諾德公司研制開發的新一代長效GLP-1類似物,用于治療II型糖尿病，司美格魯肽除降底血糖之外還有減肥和保護心血管的功效，是目前GLP-1藥物中降糖及減肥效果最好的一個藥。FDA在2017年批準注射劑型上市，2019年9月20號批準口服劑型上市。

司美格魯肽為GLP-1類似物,與人GLP-1有94％同源性。司美格魯肽的長效機制是基于對結構的修飾，司美格魯肽在第8位修改為α-氨基異丁酸,用來增加穩定作用，避免被DPP-4酶降解。此外，通過結構修飾，把肽鏈第26位的賴氨酸位置連接上18碳脂肪二酸側鏈，相比C16的利拉魯肽，增長的碳鏈對白蛋白的親和力增強5～6倍，與白蛋白結合，增大了本品的分子量，避免快速被腎臟清除并防止代謝性降解,延長體內半衰期。并把34位的賴氨酸替換成精氨酸，以確保26位C18側鏈的穩定性。因此，本品半衰期長達1周,司美格魯肽為GLP-1受體激動劑，結合且激活GLP-1受體，通過介導GLP-1受體，以葡萄糖依賴的方式，刺激胰島素分泌，并降低胰高血糖素分泌。此外，血糖降低也與餐后初始階段延遲胃排空有關。

目前出現了較多關于多肽純化的公開技術，如CN201711474148公開了一種純化司美格魯肽的方法、CN201811482820公開了一種司美格魯肽純化專用填料及其純化方法、CN201911201916公開了一種司美格魯肽的分離純化方法、CN201810663478公開了一種純化司美格魯肽的方法?，F有純化方法存在粗肽樣品溶解方法不穩定、對特定雜質去除不明顯，純化收率過低等問題。

發明內容

本發明針對司美格魯肽的理化特征，提供了一種操作性強、工藝簡單而穩定、收率高的司美格魯肽純化工藝。

為實現上述目的本發明采取以下技術方案：

一種司美格魯肽的純化方法，其包括如下步驟：

1)獲得固相合成方法裂解樹脂以及脫除保護基的司美格魯粗肽，用含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液溶解司美格魯肽粗肽；

2)取司美格魯肽粗肽溶液用0.22μm有機濾膜過濾，收集濾液備用；

3)第一步純化以反相填料為固定相，用含有機溶劑的緩沖鹽溶液為A相，乙腈為B相，進行梯度洗脫，收集純度大于95％，單雜小于0.8％的組分濃縮；

4)第二步純化以反相填料為固定相，稀醋酸溶液為A相，乙腈為B相，進行梯度洗脫，收集純度大于99.5％，單雜小于0.1％的組分；