[發明專利]一種司美格魯肽的純化方法

有效

• 申請號: 202011039848.7
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112175068B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 馬亞平;付信;張凌云;戴政清;王宇恩;周迎春;王慶磊
• 申請（專利權）人: 深圳深創生物藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/14
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種司美格魯肽的純化方法，其包括如下步驟：

1)獲得固相合成方法制備得到的裂解樹脂以及脫除保護基的司美格魯粗肽，用含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液溶解司美格魯肽粗肽；

2)取司美格魯肽粗肽溶液用0.22μm有機濾膜過濾，收集濾液備用；

3)第一步純化以反相填料為固定相，用含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液為A相，乙腈為B相，進行梯度洗脫，收集純度大于95％，單雜小于0.8％的組分濃縮；所述的反相填料選自四烷基硅烷鍵合硅膠填料、八烷基硅烷鍵合硅膠填料；

4)第二步純化以反相填料為固定相，稀醋酸溶液為A相，乙腈為B相，進行梯度洗脫，收集純度大于99.5％，單雜小于0.1％的組分；所述的反相填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料；

5)將濃縮后的樣品進行冷凍干燥，獲得司美格魯肽；

每1L含有機溶劑的磷酸鹽緩沖溶液通過以下方法制備，量取2mL磷酸倒入700-750mL水，用三乙胺調pH到6.5-9，加入150-250mL乙腈，用水定容到1L；

所述的純化方法為去除司美格魯肽消旋雜質的方法，所述的司美格魯肽消旋雜質為H-D-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OCDA)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH【His1消旋】以及H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-D-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OCDA)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH【Ala18消旋】；

步驟3)中梯度洗脫的方法為B％：20％-40％，線性梯度洗脫60min；

步驟4)中梯度洗脫的方法為B％：30％-50％，線性梯度洗脫60min。

2.根據權利要求1所述的純化方法，在步驟3)中有機溶劑為極性有機試劑。

3.根據權利要求2所述的純化方法，在步驟3)中極性有機試劑為甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇中的至少一種。

4.根據權利要求1所述的純化方法，步驟1)和步驟3)中有機溶劑的體積百分比為10％-30％；且步驟1)和步驟3)中有機溶劑體積百分比相差不高于10％。

5.根據權利要求1所述的純化方法，步驟1)和步驟3)中有機溶劑的體積百分比為15-25％。

6.根據權利要求1所述的純化方法，步驟3)中所述的反相填料的粒徑在5-100微米之間。

7.根據權利要求1所述的純化方法，步驟3)中所述的反相填料的粒徑為10μm。

8.根據權利要求1所述的純化方法，步驟4)中所述的反相填料的粒徑在5-100μm之間。

9.根據權利要求1所述的純化方法，步驟4)中所述的反相填料的粒徑為10μm。

10.根據權利要求1所述的純化方法，在步驟4)中所述的稀醋酸濃度為體積百分比為0.01％-1.0％。