[發(fā)明專(zhuān)利]一種司美格魯肽的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011039848.7
• 申請(qǐng)日: 2020-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112175068B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬亞平;付信;張凌云;戴政清;王宇恩;周迎春;王慶磊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳深創(chuàng)生物藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/605
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/605;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/14
• 代理公司: 北京市誠(chéng)輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種司美格魯肽的純化方法，其包括如下步驟：

1)獲得固相合成方法制備得到的裂解樹(shù)脂以及脫除保護(hù)基的司美格魯粗肽，用含有機(jī)溶劑的磷酸鹽緩沖溶液溶解司美格魯肽粗肽；

2)取司美格魯肽粗肽溶液用0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，收集濾液備用；

3)第一步純化以反相填料為固定相，用含有機(jī)溶劑的磷酸鹽緩沖溶液為A相，乙腈為B相，進(jìn)行梯度洗脫，收集純度大于95％，單雜小于0.8％的組分濃縮；所述的反相填料選自四烷基硅烷鍵合硅膠填料、八烷基硅烷鍵合硅膠填料；

4)第二步純化以反相填料為固定相，稀醋酸溶液為A相，乙腈為B相，進(jìn)行梯度洗脫，收集純度大于99.5％，單雜小于0.1％的組分；所述的反相填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料；

5)將濃縮后的樣品進(jìn)行冷凍干燥，獲得司美格魯肽；

每1L含有機(jī)溶劑的磷酸鹽緩沖溶液通過(guò)以下方法制備，量取2mL磷酸倒入700-750mL水，用三乙胺調(diào)pH到6.5-9，加入150-250mL乙腈，用水定容到1L；

所述的純化方法為去除司美格魯肽消旋雜質(zhì)的方法，所述的司美格魯肽消旋雜質(zhì)為H-D-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OCDA)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH【His1消旋】以及H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-D-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OCDA)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH【Ala18消旋】；

步驟3)中梯度洗脫的方法為B％：20％-40％，線(xiàn)性梯度洗脫60min；

步驟4)中梯度洗脫的方法為B％：30％-50％，線(xiàn)性梯度洗脫60min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，在步驟3)中有機(jī)溶劑為極性有機(jī)試劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法，在步驟3)中極性有機(jī)試劑為甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，步驟1)和步驟3)中有機(jī)溶劑的體積百分比為10％-30％；且步驟1)和步驟3)中有機(jī)溶劑體積百分比相差不高于10％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，步驟1)和步驟3)中有機(jī)溶劑的體積百分比為15-25％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，步驟3)中所述的反相填料的粒徑在5-100微米之間。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，步驟3)中所述的反相填料的粒徑為10μm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，步驟4)中所述的反相填料的粒徑在5-100μm之間。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，步驟4)中所述的反相填料的粒徑為10μm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，在步驟4)中所述的稀醋酸濃度為體積百分比為0.01％-1.0％。