[發明專利]與SARS-CoV-2 RBD結合的羊駝源納米抗體

有效

• 申請號: 202011037426.6
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112094343B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 金騰川;馬歡;曾威紅
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/46;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 高麗娜;張瑩

本公開涉及與SARS?CoV?2 RBD結合的羊駝源抗體或其抗原結合片段，具體涉及能以高親和力結合新冠病毒(SARS?CoV?2)受體結合區域(RBD)的羊駝源納米抗體或由其組成的雙表位特異性抗體或其抗原結合片段，其能夠用于預防、治療和/或診斷SARS?CoV?2感染。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及用于治療和診斷用的抗SARS-CoV-2 RBD的納米抗體序列。

背景技術

SARS-CoV-2屬于冠狀病毒，其導致的肺炎稱為COVID-19。SARS-CoV-2通過其表面突刺蛋白(spike)的受體結合區域(RBD)與上皮細胞表面的血管緊張素轉換酶2(ACE2)結合后進入細胞，完成侵染。

從康復患者體內分離的全人源抗體被證實具有很好的抗病毒作用，但這些都是傳統的單克隆抗體，由2條重鏈和2條輕鏈組成。具有分子量大，生產工藝復雜，不易加工改造等局限性。

在駱駝科動物體內存在一種天然缺失輕鏈的抗體，即重鏈抗體，其可變區僅由重鏈組成，該可變區簡寫為VHH，該可變區蛋白直徑小于10納米，因此又被稱為納米抗體。納米抗體具有分子量小、穿透性強、易于表達、易于基因改造以及易于結合多個表位等優點。

目前尚無抗SARS-CoV-2 RBD的羊駝源天然納米抗體獲批用于治療COVID19。

發明內容

本公開提供了能以高親和力結合新冠病毒(SARS-CoV-2)受體結合區域(RBD)的羊駝源重鏈抗體可變區序列(VHH)，該可變區序列又稱為納米抗體，其能夠用于預防、治療和/或診斷SARS-CoV-2感染。

發明人采用體外重組表達的SARS-CoV-2 RBD蛋白對2頭小羊駝進行3次免疫，然后分離出外周血淋巴細胞并抽提細胞的總RNA，隨后反轉錄為cDNA。再以此cDNA為模板，用特異引物擴增出納米抗體序列。我們分離獲得7株納米抗體。分別命名為aRBD-2、aRBD-3、aRBD-5、aRBD-7、aRBD-41、aRBD-42和aRBD-54，其氨基酸序列分別如下：

aRBD-2的氨基酸序列：

aRBD-3的氨基酸序列：

aRBD-5的氨基酸序列：

aRBD-7的氨基酸序列：

aRBD-41的氨基酸序列：

aRBD-42的氨基酸序列：

aRBD-54的氨基酸序列：

所述7株納米抗體的3個抗原互補決定區(CDR1、CDR2和CDR3)如劃線部分所示，具體地：

aRBD-2：

CDR1：GRTYTM(SEQ ID NO：1)

CDR2：EFVAAMRWSDTD(SEQ ID NO：2)

CDR3：AGEAWLARSTHHYDY(SEQ ID NO：3)

aRBD-3：

CDR1：GLTLDYYAI(SEQ ID NO：4)

CDR2：EGVSCISHPGGSTN(SEQ ID NO：5)