[發明專利]含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法

有效

• 申請號: 202011035710.X
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112198251B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 孫晶晶;殷瑋;戚園梅;凌珊;彭佳裕;蔡文鎮
• 申請（專利權）人: 廣州醫藥研究總院有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 顧書玲;萬志香

本發明涉及含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法。該方法包括以下步驟：(1)儲備液的制備：脂蟾毒配基、蟾毒靈、華蟾酥毒基、華蟾毒他靈、遠華蟾蜍精、沙蟾毒精，分別溶解于(50±5)％乙腈水溶液中，制得標準品儲備溶液；取利血平溶解于(50±5)％乙腈水溶液中，制得利血平儲備溶液；(2)工作溶液的制備；(3)待測樣品溶液的制備；(4)將步驟(3)所得待測樣品溶液進行液相色譜分離；將液相色譜分離后的樣品進行質譜分析。本發明方法的檢測過程中色譜峰形極佳，每個化合物的通道都只有唯一的目標峰，避免了其他如溶劑效應等的干擾，操作簡單、分析快速、特異性高、分離度高。

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，特別是涉及含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法。

背景技術

蟾皮為兩棲綱蟾蜍屬動物蟾蜍剖去內臟的干燥體，首載于《本草逢原》，性辛、涼，微毒，具有清熱解毒、利水消腫等多種功效。藥用蟾皮多來源于動物中華大蟾蜍。蟾素片(口服液、注射液)、鶴蟾片、大敗毒膠囊、季德勝蛇藥片等臨床應用較廣泛的中成藥中均含有該藥材。隨著化學成分和藥理活性的研究進展，除傳統的強心作用之外，蟾皮類藥材及其有效成分顯著的抗腫瘤活性越來越受到廣大研究者的關注。迄今為止，從中分離得到的化學成分主要包括蟾蜍甾烯內酯、吲哚生物堿、環酰胺和小分子環肽、甾醇及其他類化合物，其中，蟾蜍甾烯內酯和吲哚生物堿被認為是具有強心和抗腫瘤活性的有效成分。由于蟾皮類藥材毒性較大，故相關藥物在體內的藥代動力學研究顯得尤為重要。且蟾皮類藥物的療效和不良反應與血漿中藥物濃度密切相關，需要根據血藥濃度調整給藥方案，故有必要對其進行血藥濃度監測。

《中國藥典》2015年版以酯蟾毒配基和華蟾酥毒基的總毒基量為蟾酥的質控指標，但尚未收載干蟾皮。

發明內容

本發明的目的在于提供一種含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法，該檢測方法操作簡單、分析快速、特異性高、分離度高。

本發明采用如下技術方案：

含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法，采用液相色譜串聯質譜檢測，包括如下步驟：

(1)儲備溶液的制備

取標準品脂蟾毒配基、蟾毒靈、華蟾酥毒基、華蟾毒他靈、遠華蟾蜍精、沙蟾毒精，分別溶解于50±5％乙腈水溶液中，制得標準品儲備溶液；將標準品儲備溶液混合，得到混合標準品儲備溶液；

取利血平溶解于50±5％乙腈水溶液中，制得利血平儲備溶液；

(2)工作溶液的制備

用50±5％乙腈水溶液分別稀釋混合標準品儲備溶液，制得混合標準曲線樣本工作溶液和混合質控樣本工作溶液；

用50±5％乙腈水溶液稀釋利血平儲備溶液，制得內標工作溶液；

(3)待測樣品溶液的制備

待測樣品溶液為待測血漿樣品溶液或待測組織樣品溶液，制備方法如下：

待測血漿樣品溶液的制備：取血漿樣品，加入內標工作溶液和乙腈，離心，取所得上清液作為待測血漿樣品溶液；

待測組織樣品溶液的制備：取組織樣品，勻漿，在所得勻漿液中加入內標工作溶液和乙腈，離心，取所得上清液作為待測組織樣品溶液；

(4)將步驟(3)所得待測樣品溶液進行液相色譜分離，再將分離后的樣品進行質譜分析。

優選地，在上述的檢測方法中，液相色譜分離采用梯度洗脫的方式，以 0.1±0.02％甲酸水溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，梯度洗脫的過程如下：

0～0.3分鐘，流動相B：40±5％→40±5％；