[發明專利]含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法

有效

• 申請號: 202011035710.X
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112198251B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 孫晶晶;殷瑋;戚園梅;凌珊;彭佳裕;蔡文鎮
• 申請（專利權）人: 廣州醫藥研究總院有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 顧書玲;萬志香

1.含蟾皮類藥材制劑中六種蟾蜍甾烯內酯成分在血漿或組織中濃度的檢測方法，采用液相色譜串聯質譜檢測，其特征在于，包括如下步驟：

（1）儲備溶液的制備

取標準品脂蟾毒配基、蟾毒靈、華蟾酥毒基、華蟾毒他靈、遠華蟾蜍精、沙蟾毒精，分別溶解于50±5%乙腈水溶液中，制得標準品儲備溶液；將標準品儲備溶液混合，得到混合標準品儲備溶液；

取利血平溶解于50±5%乙腈水溶液中，制得利血平儲備溶液；

（2）工作溶液的制備

用50±5%乙腈水溶液分別稀釋混合標準品儲備溶液，制得混合標準曲線樣本工作溶液和混合質控樣本工作溶液；

用50±5%乙腈水溶液稀釋利血平儲備溶液，制得內標工作溶液；

（3）待測樣品溶液的制備

待測樣品溶液為待測血漿樣品溶液或待測組織樣品溶液，制備方法如下：

待測血漿樣品溶液的制備：取血漿樣品，加入內標工作溶液和乙腈，離心，取所得上清液作為待測血漿樣品溶液；待測組織樣品溶液的制備：取組織樣品，勻漿，在所得勻漿液中加入內標工作溶液和乙腈，離心，取所得上清液作為待測組織樣品溶液；

加入的乙腈與加入內標工作溶液后的血漿樣品或勻漿液的體積比為4:1；

（4）將步驟（3）所得待測樣品溶液進行液相色譜分離，再將分離后的樣品進行質譜分析；

所述液相色譜分離采用梯度洗脫的方式，以0.1±0.02%甲酸水溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，所述梯度洗脫的過程如下：

0～0.3分鐘，流動相B：40％→40％；

0.3～0.5分鐘，流動相B：40％→95％；

0.5～2.0分鐘，流動相B：95％→95％；

2.0～2.2分鐘，流動相B：95％→40％；

2.2～3分鐘，流動相B：40％→40％；

所述液相色譜的色譜條件為：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；

所述色譜柱為：BEHC18，2.1×50mm，1.7μm；

流速：0.3±0.05mL/min；

進樣體積：3.00±0.5μL；

柱溫：40±5℃；

自動進樣器溫度：4±4℃；

洗針液： 50±5%乙腈水溶液；

洗沖速度：30-40μL/sec；

洗針液體積：400-600μL；

所述質譜分析的條件為：

離子化模式：電噴霧離子源；正離子模式；多反應監測；

離子源參數：氣簾氣：20psi；離子源氣體1：30psi；離子源氣體2：30psi；

離子源噴霧電壓：5500±10V；

離子源溫度：500±10℃；

分辨率Q1/Q3：Unit/Unit；

碰撞氣：Medium；

暫停時間：20±1 msec；

質譜采集時間為3.00±0.2min。