[發明專利]綠僵菌侵染時竹林金針蟲基因表達分析的內參基因及應用

在審

• 申請號: 202011033789.2
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112126689A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 葉碧歡;陳友吾;李海波;宋其巖;沈建軍;胡傳久;胡楊;尚素微
• 申請（專利權）人: 浙江省林業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/12
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

本發明公開了用于平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲(篩胸梳爪叩甲幼蟲)基因表達分析的內參基因組合RPS3和RPS27a基因及其應用。本發明首次提出了平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲內參基因組合，解決了現有竹林金針蟲的實時熒光定量PCR分析中缺乏內參基因的現狀，相比使用單一的內參基因，本發明使用RPS3和RPS27a基因的組合，得到的結果更準確可靠。

(一)技術領域

本發明涉及一組用于平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲(篩胸梳爪叩甲幼蟲)基因表達分析的內參基因組合及其應用。

(二)背景技術

篩胸梳爪叩甲(Melanotus cribricollis)幼蟲，俗稱竹林金針蟲，取食竹筍的地下部分，在我國南方竹林地區危害嚴重，不僅造成竹筍產量顯著減少，甚至可導致竹種無法成竹，嚴重制約竹林自然更新。綠僵菌等昆蟲致病真菌在害蟲防治過程中發揮重要作用，對鞘翅目和鱗翅目等幾百種害蟲均有一定防效。為了更有效地利用生防菌防治農林害蟲，需更深入全面了解真菌侵染機制、害蟲免疫抗性機制以及兩者間的互作關系等信息，如何準確檢測與分析相關基因的表達水平對于該類研究工作十分重要。

內參基因又稱看家基因，理想的內參基因其表達水平應在各種實驗條件下基本保持穩定。常用的qRT-PCR內參基因包括Actin(ACT)、Tubulin(TUB)、Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)、Elongation factor 1(EF1)、Syntaxin(SYN)和Arginine kinase(AK)等。

實際操作中Actin等內參基因在不同試驗條件下其表達水平變異很大，因此qRT-PCR檢測基因表達水平時還應根據研究物種，試驗條件和研究目的等因素首先篩選內參基因，這對準確獲知目的基因表達水平尤為重要。目前，關于竹林金針蟲(篩胸梳爪叩甲幼蟲)內參基因系統的篩選和評估還未見報到，包括對平沙綠僵菌(Metarhizium pingshaense)侵染不同時期的竹林金針蟲的內參篩選評估，這將不利于探究蟲菌互作相關基因的表達水平研究。

(三)發明內容

針對上述現有技術中存在的缺陷和研究需求，本發明提供了一組用于平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲基因表達分析的內參基因及其應用。

本發明采用的技術方案是：

用于平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲相關基因表達分析的內參基因組合，由RPS3和RPS27a基因組成。RPS3即核糖體蛋白S3(Ribosomal protein S3)基因，是核糖體40S小亞基的組成蛋白，具有核糖體外功能，在DNA損傷修復、基因表達調控、細胞凋亡等過程中發揮重要作用；PRS27a即泛素-核糖體蛋白S27a(Ribosomal protein S27a)基因，是泛肽和核糖體蛋白的融合蛋白。

竹林金針蟲RPS3基因完整序列如下(853bp)：