[發明專利]綠僵菌侵染時竹林金針蟲基因表達分析的內參基因及應用

在審

• 申請號: 202011033789.2
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112126689A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 葉碧歡;陳友吾;李海波;宋其巖;沈建軍;胡傳久;胡楊;尚素微
• 申請（專利權）人: 浙江省林業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/12
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

1.用于平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲相關基因表達分析的內參基因組合，由RPS3基因和RPS27a基因組成。

2.如權利要求1所述的內參基因組合，其特征在于所述RPS3基因序列如SEQ ID No.1所示，所述RPS27a基因序列如SEQ ID No.2所示。

3.權利要求1或2所述內參基因組合在實時熒光定量PCR檢測竹林金針蟲相關基因表達中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述內參基因組合用于平沙綠僵菌不同侵染時期的竹林金針蟲相關基因表達的實時熒光定量PCR分析。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述應用為：針對金針蟲PGRP、Prx、SDR(1)、SDR(2)、SDR(3)和SDR(4)基因分別設計特異性擴增引物，并根據內參基因RPS3基因和RPS27a基因特征序列設計特異性擴增引物，采用上述引物分別以竹林金針蟲為實驗材料進行擴增，根據目的基因和內參基因的CT值計算相對表達量，所述特異性擴增引物序列如下：

PGRP基因：

上游引物：5'-TGTCGTACTTCTGGCTATCATTG-3'

下游引物：5'-TGTGATGGAGGGTTTACTTGC-3'

Prx基因：

上游引物：5'-CTATCCCTTAGACTTCACCTTCG-3'

下游引物：5'-ATTTCTCCCAAACCTCCCTG-3'

SDR(1)基因：

上游引物：5'-CGGCATTGACGGAAACTTTAC-3'

下游引物：5'-GGTTTCCACAGACTTTTGCG-3'

SDR(2)基因：

上游引物：5'-AGGTGCTAGTTCGGGAATTG-3'

下游引物：5'-CGTGTAATTTGCCAGGTTTTCC-3'

SDR(3)基因：

上游引物：5'-GGATTACGAGCATAAGTCCTGG-3'

下游引物：5'-CGGCGATGTCTTCAGATTTTAAC-3'

SDR(4)基因：

上游引物：5'-TTAGGGTTTCAGTCAAGGCAG-3'

下游引物：5'-GAAGCCGTCCAAGATATGAAAG-3'

內參RPS3基因：

上游引物：5'-CAATAGCGCACAAACCACG-3'

下游引物：5'-TGTATTGGGTGAAAAGGGAAGG-3'

內參RPS27a基因：

上游引物：5'-CTTGTCCTGAATCTTTGCCTTG-3'

下游引物：5'-GTTCTTTTGGTAGCGTGTCATG-3'。