[發明專利]通過IGFBP5介導動脈粥樣化的動物模型及建立方法

有效

• 申請號: 202011033316.2
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112111521B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 相奧琪;梁國朵;余琦;張云婷
• 申請（專利權）人: 西安醫學院
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;A01K67/027
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 寧文濤

本發明公開了通過IGFBP5介導的動脈粥樣硬化動物模型及建立方法，所述動物模型按照以下步驟進行：步驟1、構建腺相關病毒表達載體AAV?IGFBP5；步驟2、將步驟1得到的所述腺相關病毒載體通過肌肉注射到ApoE^?/?小鼠中，注射后采用高脂飼料喂養6周即得到本發明的動物模型。本發明模型建立過程簡便、成功率高、結果穩定可靠，節約了飼養實驗動物的時間，還避免了模型構建失敗的后果，并且免疫原性低，安全系數更高。本發明建立的動物模型在動脈粥樣硬化的病因學、病理學、藥物篩選、臨床診斷和治療等研究中具有重要的實際應用價值，可廣泛推廣。

技術領域

本發明屬于基礎醫學技術領域，具體涉及一種通過IGFBP5介導動脈粥樣化的動物模型，還涉及上述動脈粥樣化動物模型的建立方法。

背景技術

動脈粥樣硬化是多種心血管疾病的主要原因，脂質代謝障礙為動脈粥樣硬化的病變基礎，其病變從血管內膜開始，一般先有脂質和復合糖類積聚、出血及血栓生成，進而纖維組織增生及鈣質沉著，累及動脈中層的逐漸蛻變和鈣化，導致動脈壁增厚變硬，存在于動脈內膜積聚的脂質成黃色粥樣，稱動脈粥樣硬化。

胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBPs)是胰島素的成員總科的蛋白質。在哺乳動物中，已經鑒定出6種典型的IGFBPs，IGFBP5是IGFBPs家族中最保守的蛋白，它已經被證明可以調節細胞生長、分化、遷移、侵襲和細胞代謝、影響糖尿病和胰島素耐受性等。

在對動脈粥樣硬化進行實驗研究時，需要制備實驗動物模型。現有的技術中，中小型動物在實驗模型的構建中，一般都會使用高脂飼養以及球囊損傷的方法，需要12周去干預實驗動物，耗費的時間與人力都十分龐大。

發明內容

本發明第一個目的是提供一種通過IGFBP5介導動脈粥樣硬化的動物模型，縮短了動物模型的構建時間，且表達更加穩定，安全系數高。

本發明第二個目的是提供上述IGFBP5動物模型的構建方法。

本發明所采用的第一種技術方案是：通過IGFBP5介導的動脈粥樣硬化動物模型，動物模型通過外源注射腺相關病毒系統性高表達IGFBP5得到。

本發明所采用的第二種技術方案是：通過IGFBP5介導的動脈粥樣硬化動物模型的建立方法，按照以下步驟進行：

步驟1、構建腺相關病毒表達載體AAV-IGFBP5；

步驟2、將步驟1得到的腺相關病毒載體AAV-IGFBP5通過肌肉注射到ApoE^-/-小鼠中，注射后采用高脂飼料喂養6周，6周后得到的小鼠即得到本發明的動物模型。

本發明所采用的第二種技術方案的特點還在于，

步驟1中腺相關病毒表達載體AAV-IGFBP5具體構建步驟如下：

步驟1.1、采用根據已知目的基因IGFBP5 cDNA序列設計合成擴增引物，上游引物如SEQ ID NO:1所示，下游引物如SEQ ID NO:2所示，用PCR法擴增目的基因IGFBP5，擴增條件：98℃，3min；98℃，10s；55℃，15s；72℃，1min，35個循環；72℃，10min；4℃，5min，擴增完畢用瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收PCR產物；

步驟1.2、將步驟1.1所得的目的基因PCR產物用Bam HI、Xhol內切酶雙酶切，同時用這兩種酶內切酶切割rAAV載體，將切割后的目的基因與rAAV載體混合，用T4 DNA連接酶在4℃的條件下連接12h，將連接得到的產物轉化到E.coliDH5α感受態細胞中，經Kan+LB培養基培養后采用堿裂解法提取重組質粒，對得到的重組質粒進行陽性克隆鑒定；