[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011029716.6
• 申請(qǐng)日: 2020-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112094339A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳曉春;吳華偉;鄧永;李俊平;曹明慧;趙煒;侯力丹;蘇佳;薛青紅;王樂(lè)元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類號(hào): C07K16/08
• 分類號(hào): C07K16/08;C07K16/06;G01N33/569
• 代理公司: 北京君智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

本發(fā)明涉及一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清及其制備。所述血清主要用于獸用生物制品的質(zhì)量控制，該血清的制備包括豬圓環(huán)病毒2型免疫原的制備、陰性試驗(yàn)動(dòng)物的篩選、免疫及抗體水平監(jiān)測(cè)及陽(yáng)性血清檢定。采用本發(fā)明所述工藝制備的豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清中和效價(jià)高，能解決目前獸用生物制品檢驗(yàn)中豬圓環(huán)病毒2型毒種中和困難的難題；本發(fā)明制備的豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清純凈性好，無(wú)菌、無(wú)支原體、無(wú)外源病毒污染；特異性好，不含有除豬圓環(huán)病毒2型抗體外的其他豬病常見(jiàn)病原抗體。以上特征充分滿足了檢驗(yàn)用陽(yáng)性血清的要求，對(duì)于提升我國(guó)豬圓環(huán)病毒2型疫苗質(zhì)量具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清及其制備方法，屬于生物技術(shù)和動(dòng)物病毒學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

豬圓環(huán)病毒病(PCVD)的含義是指一系列綜合癥侯群或是與PCV2(porcinecircovirus 2type)感染相關(guān)的疾病。現(xiàn)已證實(shí)，PCV2主要侵害豬體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫抑制及機(jī)體抵抗力降低，干擾和破壞豬對(duì)其他疫病免疫抗體的產(chǎn)生和維持，從而繼發(fā)其他疾病。因此，在養(yǎng)殖業(yè)中，PCV2的危害往往不是孤立的，常引起其它重要疾病(如豬細(xì)小病毒病、豬繁殖與呼吸綜合征、豬副嗜血桿菌病、豬肺炎支原體病、豬鏈球菌病、多殺性巴氏桿菌病等)的繼發(fā)感染。豬圓環(huán)病毒病發(fā)病率可達(dá)50％，死亡率可能因豬場(chǎng)條件、繼發(fā)感染情況而不同，一般在5％～70％。豬圓環(huán)病毒病中，以斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post weaningmultisystemic wasting syndrome，PMWS)對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成的危害最為嚴(yán)重。

目前我國(guó)豬圓環(huán)病以預(yù)防為主，主要以全病毒滅活疫苗和基因工程亞單位疫苗為主。全病毒滅活疫苗采用PK15細(xì)胞培養(yǎng)，其生產(chǎn)的過(guò)程涉及多種生物性原材料，如血清、胰酶、細(xì)胞等，極易受到外源因子的污染。而所污染的外源因子的不確定性給檢驗(yàn)帶來(lái)極大的困難。尤其是種毒，按照現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》的規(guī)定，需進(jìn)行外源病毒檢驗(yàn)，檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用特異性血清對(duì)疫苗毒進(jìn)行中和。抗血清的制備技術(shù)雖比較成熟，但因病原特點(diǎn)不同及用途不同，制備的關(guān)鍵點(diǎn)有所差異。目前，國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利查詢已公布的動(dòng)物性抗血清約30余項(xiàng)，但尚未有豬圓環(huán)病毒陽(yáng)性血清制備方法的報(bào)道和專利。在獸用生物制品外源病毒檢驗(yàn)過(guò)程中，低效價(jià)的豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清不能完全中和疫苗毒及種毒，且生產(chǎn)企業(yè)自行制備的血清存在特異性差、效價(jià)低、對(duì)細(xì)胞毒性大、外源因子污染等問(wèn)題，嚴(yán)重影響了產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)。

本發(fā)明提供了一種針對(duì)豬圓環(huán)病毒2型高效價(jià)、成分單一、純凈良好的特異性陽(yáng)性血清的制備工藝，該工藝制備的陽(yáng)性血清充分滿足了外源病毒檢驗(yàn)對(duì)檢驗(yàn)試劑的要求，解決豬圓環(huán)病毒疫苗質(zhì)量控制檢驗(yàn)試劑短缺問(wèn)題，對(duì)于獸用生物制品行業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決獸用生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)短缺問(wèn)題，提供了一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清制備工藝。采用該工藝制備的陽(yáng)性血清中和效價(jià)高，能解決目前豬圓環(huán)病毒2型毒種外源病毒檢驗(yàn)中和用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)問(wèn)題；該工藝制備的陽(yáng)性血清純凈性好，不含有其他豬常見(jiàn)病原；特異性好，不含有除豬圓環(huán)病毒2型抗體外的其他豬常見(jiàn)病原抗體。以上特征充分滿足了獸用生物制品檢驗(yàn)對(duì)陽(yáng)性血清的要求，解決了豬圓環(huán)病毒2型疫苗質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)試劑短缺問(wèn)題，對(duì)于獸用生物制品行業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。

為實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明實(shí)施了以下技術(shù)方案：

1.一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清，其特征在于該陽(yáng)性血清是采用剖腹產(chǎn)、隔離飼養(yǎng)、人工飼喂的方式，排除了母源抗體的干擾的CDCD豬(剖腹產(chǎn)且不吃母乳的豬，下同)經(jīng)高濃縮抗原多次免疫獲得的，其血清的中和抗體效價(jià)≥1:64；

2.本發(fā)明所述一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清，其特征在于該血清的制備方法是：

(1)種毒制備豬圓環(huán)病毒2型毒種采用經(jīng)敏感、純凈的PK15細(xì)胞進(jìn)行微載體懸浮培養(yǎng)，收獲病毒液，并經(jīng)超濾濃縮50～100倍以上去除小分子雜蛋白，收集病毒液，再經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)和外源病毒檢驗(yàn)合格，病毒含量不低于10^8.0TCID₅₀/mL；