[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011029716.6
• 申請(qǐng)日: 2020-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112094339A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳曉春;吳華偉;鄧永;李俊平;曹明慧;趙煒;侯力丹;蘇佳;薛青紅;王樂(lè)元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類號(hào): C07K16/08
• 分類號(hào): C07K16/08;C07K16/06;G01N33/569
• 代理公司: 北京君智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

1.一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清，其特征在于該陽(yáng)性血清是采用剖腹產(chǎn)、隔離飼養(yǎng)、人工飼喂的方式，排除了母源抗體的干擾的CDCD豬經(jīng)高濃縮抗原多次免疫獲得，其血清的中和抗體效價(jià)≥1:64。

2.一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清，其特征在于該血清的制備方法是：

(1)種毒制備：PCV2毒種采用經(jīng)敏感、純凈的PK15細(xì)胞進(jìn)行微載體懸浮培養(yǎng)，收獲病毒液，并經(jīng)超濾濃縮50～100倍以上去除小分子雜蛋白，收集病毒液，再經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)和外源病毒檢驗(yàn)合格，病毒含量不低于10^8.0TCID₅₀/mL；

(2)免疫原制備：按病毒液總量1/4000(V/V)加入β-丙內(nèi)酯(純度97％)，混勻，置2～8℃滅活24小時(shí)再經(jīng)37℃水解2小時(shí)；經(jīng)滅活檢驗(yàn)合格后，按每mL疫苗含滅活前的PCV2病毒液10^8.0TCID₅₀稀釋，按抗原3份與ISA 15A佐劑1份的比例充分混合乳化獲得免疫原，

(3)動(dòng)物的選擇：采用剖腹產(chǎn)且不吃母乳的CDCD豬，隔離飼養(yǎng)、人工飼喂，豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)2型病毒、牛病毒性腹瀉病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬流行性腹瀉病毒、口蹄疫病毒、豬乙腦病毒等病原的抗原和抗體均為陰性，

(4)免疫及抗體水平監(jiān)測(cè)：將制備好的乳化抗原每頭豬肌肉注射1mL作為基礎(chǔ)免疫；基礎(chǔ)免疫21天后，每頭豬分別肌肉注射乳化抗原5ml，繼續(xù)觀察；加強(qiáng)免疫后28天再用滅活前濃縮抗原(病毒含量為10^8.0TCID₅₀/ml)攻擊，2ml/頭；攻毒后14天開(kāi)始每隔7天采血檢測(cè)血清中豬圓環(huán)病毒中和抗體效價(jià)及血清中PCV2抗原；血清中和抗體效價(jià)≥1:64及血清中PCV2抗原檢測(cè)為陰性為最佳采血時(shí)間；

(5)血清的檢驗(yàn)：對(duì)血清進(jìn)行性狀檢驗(yàn)、無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)、中和效價(jià)測(cè)定、特異性檢驗(yàn)。特異性檢驗(yàn)包括豬偽狂犬病毒、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬口蹄疫病毒、牛病毒性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行型腹瀉病毒、豬輪狀病毒、豬細(xì)小病毒、豬乙腦病毒等豬常見(jiàn)病原。

3.如權(quán)利要求1-2所述一種豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性血清，其特征在于該血清主要用于獸用生物制品質(zhì)量控制，也可用于豬圓環(huán)病毒2型的其他相關(guān)檢測(cè)。