[發明專利]一種判斷葡萄糖淀粉酶的活力檢測是否準確的方法

在審

• 申請號: 202011029577.7
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112111556A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 佟毅;任曉冬;李義;陶進;梁穎超;李文釗;李東旭;張曉蕓;賈力耕
• 申請（專利權）人: 吉林中糧生化有限公司;吉林大學
• 主分類號: C12Q1/40
• 分類號: C12Q1/40
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

本發明公開了一種判斷葡萄糖淀粉酶的酶活力檢測是否準確的方法，將國標法與葡萄糖試劑盒法相結合，將兩種方法測得酶活力的相除，得到比值，該比值為一個定值；在生產與應用葡萄糖淀粉酶的過程中，兩種測定方法聯用，得到酶活力比值。在工業生產中測定葡萄糖淀粉酶活力時，可以依據比值判斷每一次酶活力檢測的準確性；從而滿足準確檢測葡萄糖淀粉酶酶活力的要求，克服了傳統測定葡萄糖淀粉酶活性方法中存在的誤差過大問題。

技術領域

本發明公開了一種判斷葡萄糖淀粉酶的活力檢測是否準確的方法，利用國標法和葡萄糖試劑盒法聯用測定葡萄糖淀粉酶活力，屬于生物化學分析領域。

背景技術

葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase EC3.2.1.3)又稱糖化酶。主要存在于黑曲霉、米曲霉、根 霉等絲狀真菌和酵母中，同時也存在于人的唾液、動物胰腺及細菌中。已報道的產葡萄糖淀粉酶真菌微生物有 23個屬35個種，細菌有3屬3種，用于工業生產的菌株主要是黑曲霉。葡萄糖淀粉酶是一種外切型糖苷酶，從淀粉的非還原性末端依次水解α-1，4糖苷鍵，主要生成葡萄糖。葡萄糖淀粉酶被廣泛地應用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有機酸、甘油、淀粉糖等工業生產中，它是我國產量最大的酶制劑產品之一。

目前，在生產過程中，一般使用中國國家標準法GB1886.174-2016（以下簡稱：國標法）進行酶活力檢測，但國標法采用滴定法測酶活力，該方法操作繁瑣，滴定時需要用肉眼觀察顏色的變化，誤差較大。不同的人測同一個葡萄糖淀粉酶，會得到不同的酶活力結果。因而，無從判斷結果的準確性。葡萄糖試劑盒法測葡萄糖淀粉酶的活力相對準確，但也有不小的誤差。葡萄糖淀粉酶的成本占工業生產成本的很大部分。酶活力檢測不準確，會導致生產成本的大幅上升。

用國標法測定時，檢測指標包括麥芽糖，麥芽二糖等還原糖。而用葡萄糖試劑盒法測葡萄糖淀粉酶的活力時，檢測指標是葡萄糖。對于同一個葡萄糖淀粉酶，利用國標法測出的葡萄糖淀粉酶活力與葡萄糖試劑盒法測出的活力比值是一個定值，根據該比值可以判斷葡萄糖淀粉酶活力檢測的準確性。

在葡萄糖淀粉酶的生產和應用過程中需要經常檢測葡萄糖淀粉酶活力，本發明的目的在于建立國標法和葡萄糖試劑盒聯用，得到兩種方法測得的葡萄糖淀粉酶酶活力的比值，用該比值判定酶活檢測的準確性，以指導葡萄糖淀粉酶的生產和應用。

發明內容

本發明公開了一種判斷葡萄糖淀粉酶的酶活力檢測是否準確的方法，克服了傳統葡萄糖淀粉酶測定方法誤差過大的問題，為檢測葡萄糖淀粉酶活力的準確性提供了依據。

本發明所述的一種判斷葡萄糖淀粉酶的活力檢測是否準確的方法，是通過以下技術方案實現的：

1）利用國標法測定葡萄糖淀粉酶的酶活力

①取2個錐形瓶，其中一個為樣品瓶，另一個為空白對照瓶，向每個瓶中分別加入25mL質量濃度為20g/L的淀粉溶液和5mL pH為4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖液，搖勻40℃水浴預熱5～10min；

②向樣品瓶中分別加入2mL待測葡萄糖淀粉酶，搖勻，40℃水浴反應30min；

③分別往每個瓶中添加0.2mL質量濃度為200g/L的NaOH溶液，搖勻，迅速用水冷卻，終止酶反應；往空白對照瓶中加入2mL待測葡萄糖淀粉酶；

④從步驟③中的樣品瓶和空白對照瓶中分別吸取出的反應液5mL到碘量瓶中，加入5mL濃度為0.1M碘標液，在加入15mL濃度為0.1M的NaOH溶液，將碘量瓶放入黑暗中反應15min，取出碘量瓶，加入2mL濃度為2M的H₂SO₄，用0.05M的硫代硫酸鈉進行滴定；

根據下列公式（1）計算待測葡萄糖淀粉酶樣品的酶活力X₁，單位為U/mL或U/g：

式中：