[發明專利]一種判斷葡萄糖淀粉酶的活力檢測是否準確的方法

在審

• 申請號: 202011029577.7
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112111556A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 佟毅;任曉冬;李義;陶進;梁穎超;李文釗;李東旭;張曉蕓;賈力耕
• 申請（專利權）人: 吉林中糧生化有限公司;吉林大學
• 主分類號: C12Q1/40
• 分類號: C12Q1/40
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種判斷葡萄糖淀粉酶的活力檢測是否準確的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）利用國標法測定葡萄糖淀粉酶的酶活力

①取2個錐形瓶，其中一個為樣品瓶，另一個為空白對照瓶，向每個瓶中分別加入25mL質量濃度為20g/L的淀粉溶液和5mL pH為4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖液，搖勻40℃水浴預熱5～10min；

②向樣品瓶中分別加入2mL待測葡萄糖淀粉酶，搖勻，40℃水浴反應30min；

③分別往每個瓶中添加0.2mL質量濃度為200g/L的NaOH溶液，搖勻，迅速用水冷卻，終止酶反應；往空白對照瓶中加入2mL待測葡萄糖淀粉酶；

④從步驟③中的樣品瓶和空白對照瓶中分別吸取出的反應液5mL到碘量瓶中，加入5mL濃度為0.1M碘標液，在加入15mL濃度為0.1M的NaOH溶液，將碘量瓶放入黑暗中反應15min，取出碘量瓶，加入2mL濃度為2M的H₂SO₄，用0.05M的硫代硫酸鈉進行滴定；

根據下列公式（1）計算待測葡萄糖淀粉酶樣品的酶活力X₁，單位為U/mL或U/g：

式中：

A：滴定空白對照時，消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液是體積，單位為mL；

B：滴定樣品是時，消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液是體積，單位為mL；

C₁：硫代硫酸鈉標準滴定溶液的準確濃度，單位為mol/L；

n：稀釋倍數；

常數90.05：與1.00mL硫代硫酸鈉標準滴定溶液相當的葡萄糖的摩爾質量，單位為g/mol（=90.05）；

常數32.2：反應液的總體積，單位為mL；

常數5：吸取反應液的體積；

常數1/2：折算成1mL酶液的量；

常數2：反應30min，換算成1h的酶活力系數；

2）利用葡萄糖試劑盒法測定葡萄糖淀粉酶的酶活力

①取2支試管，其中一個為樣品管，另一個為空白對照管，向每支中分別加入2.5mL質量濃度為20g/L的淀粉溶液和0.5mL pH為4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖液，搖勻40℃水浴預熱5～10min；

②向樣品管中分別加入0.2mL待測葡萄糖淀粉酶，搖勻，40℃水浴反應30min；

③分別往每個管中添加0.02mL質量濃度為200g/L的NaOH溶液，搖勻，迅速用水冷卻，終止酶反應；往空白對照管中加入0.2mL待測葡萄糖淀粉酶；

④利用葡萄糖測定試劑盒測定反應液的葡萄糖含量，根據下列公式（2）計算待測葡萄糖淀粉酶樣品的酶活力X₂，單位為U/mL或U/g：

式中：

C_{葡萄糖含量} ：利用葡萄糖試劑盒計算出的葡萄糖含量，單位為mmol/L；

n：稀釋倍數；

常數180：葡萄糖摩爾質量，單位為g/mol；

常數3.22：反應液的總體積，單位為mL；

常數1/0.2:折算成1mL酶液的量；

常數2：反應30min，換算成1h的酶活力系數；

3）根據公式（3）計算國標法和葡萄糖試劑盒法測得葡萄糖淀粉酶酶活力比值R：

4）判斷標準：R值對應于每一種葡萄糖淀粉酶都是定值；通過R值判斷葡萄糖淀粉酶活力檢測的準確性。