[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011024021.9
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112111440B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉開泉;王瑞明;李玲;王騰飛;李丕武
• 申請（專利權(quán)）人: 齊魯工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/78;C12P17/12;C12R1/38
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.一株生產(chǎn)吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌，其特征在于，具體是將綠針假單胞菌（Pseudomonas chlororaphis）Qlu-1基因組中的phzO基因替換為外源的phzH基因，并敲除lon基因、rsmE基因、psrA基因、parS基因和rpeA基因；然后導(dǎo)入phzC基因、aroB基因、aroD基因、aroE基因、tktA基因和ppsA基因，敲除pykF基因即得；

其中，所述綠針假單胞菌（Pseudomonas chlororaphis）Qlu-1已送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2020年05月08日，保藏編號為CCTCC NO：M 2020108；

所述phzC基因、aroB基因、aroD基因、aroE基因、tktA基因和ppsA基因的堿基序列分別如SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47和SEQ IDNO.48所示；

所述外源phzH基因堿基序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如權(quán)利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述phzO基因的堿基序列如SEQ IDNO.1所示；

所述lon基因、rsmE基因、psrA基因、parS基因和rpeA基因的堿基序列分別如SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示；

所述pykF基因的堿基序列如SEQ ID NO.49所示。

3.權(quán)利要求1或2所述生產(chǎn)吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌的制備方法，其特征在于，所述方法包括：

將綠針假單胞菌Qlu-1基因組中的phzO基因替換為外源的phzH基因，然后再敲除lon基因、rsmE基因、psrA基因、parS基因和rpeA基因；然后導(dǎo)入phzC基因、aroB基因、aroD基因、aroE基因、tktA基因和ppsA基因，敲除pykF基因即得。

4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，“所述phzO基因替換為外源的phzH基因”的具體步驟包括：敲除phzO基因后得菌株QPCA-1，然后將外源phzH基因?qū)刖闝PCA-1中。