[發(fā)明專利]一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011020657.6
• 申請(qǐng)日: 2020-09-25
• 公開（公告）號(hào): CN112080463B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈艷;于夢(mèng)夢(mèng);馬超群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市曠逸生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 南京中高專利代理有限公司 32333
• 代理人: 潘甦昊

本發(fā)明公開了一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的方法，包括以下步驟：(1)取人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞于DMEM/F12培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)到80?90％時(shí)，用0.25％胰酶消化傳代；(2)將上述步驟(1)傳代培養(yǎng)得到的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基上，進(jìn)行誘導(dǎo)分化；分化培養(yǎng)基包括DMEM/F12培養(yǎng)基、胰島素18?22μg/mL、地塞米松5?10ng/mL、抗壞血酸40?50μg/mL、磺丁基?β?環(huán)糊精15?23μg/mL、甜菜堿45?52μg/mL、乙酸銦10?15ng/mL、谷胱甘肽50?60μg/mL。本發(fā)明將傳代培養(yǎng)得到的骨髓間充干細(xì)胞接種于分化培養(yǎng)基上，在分化培養(yǎng)基中添加磺丁基?β?環(huán)糊精、甜菜堿、乙酸銦協(xié)同作用，有效提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的效率，縮短成骨分化時(shí)間，為其在組織工程化骨構(gòu)建的臨床應(yīng)用提供保障。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及干細(xì)胞領(lǐng)域，尤其涉及一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的細(xì)胞，是人體新生細(xì)胞從增殖、遷移、分化直至成熟過(guò)程中的第一個(gè)細(xì)胞，是細(xì)胞治療和組織工程種子細(xì)胞的中藥來(lái)源，常見的間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于骨髓、外周血、臍帶、脂肪等。在干細(xì)胞生物學(xué)中，探究細(xì)胞增殖和分化之間的關(guān)系具有重要的意義。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是存在于骨髓組織中的一類具有自我更新、增殖能力強(qiáng)，及多向分化能力的間充質(zhì)干細(xì)胞。骨髓干細(xì)胞的可以分化成各種間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等，是未來(lái)干細(xì)胞在醫(yī)療應(yīng)用上具有巨大潛力的理想種子細(xì)胞。骨髓干細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的方向取決于外局的微環(huán)境，培養(yǎng)介質(zhì)作為細(xì)胞外化學(xué)微環(huán)境的重要調(diào)節(jié)因子已被公認(rèn)為是目前體外誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化簡(jiǎn)單、有效的方法之一，體外誘導(dǎo)條件可以決定其分化方向。在骨組織工程應(yīng)用中，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞是利用其構(gòu)建骨組織工程的一個(gè)關(guān)鍵步驟。

在向成骨方向的誘導(dǎo)過(guò)程中常常需要加入胎牛血清等外源性血清，安全性降低，而且存在誘導(dǎo)分化效率低，時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題，給臨床應(yīng)用造成不便。因此，建立一種簡(jiǎn)便、安全而又有效的成骨分化誘導(dǎo)方法，是干細(xì)胞在組織工程化骨構(gòu)建的關(guān)鍵所在。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的方法，有效提高分化效率、縮短分化時(shí)間。

本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的方法，包括以下步驟：

(1)取人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞于DMEM/F12培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)到80-90％時(shí)，用0.25％胰酶消化傳代；

(2)將上述步驟(1)傳代培養(yǎng)得到的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基上，進(jìn)行誘導(dǎo)分化；

所述分化培養(yǎng)基包括DMEM/F12培養(yǎng)基、胰島素18-22μg/mL、地塞米松5-10ng/mL、抗壞血酸40-50μg/mL、磺丁基-β-環(huán)糊精15-23μg/mL、甜菜堿45-52μg/mL、乙酸銦10-15ng/mL、谷胱甘肽50-60μg/mL。

進(jìn)一步地，所述分化培養(yǎng)基包括DMEM/F12培養(yǎng)基、胰島素20μg/mL、地塞米松8ng/mL、抗壞血酸45μg/mL、磺丁基-β-環(huán)糊精20μg/mL、甜菜堿50μg/mL、乙酸銦12ng/mL、谷胱甘肽55μg/mL。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接接種密度為1-2×10⁴個(gè)/mL。

進(jìn)一步地，所述步驟(2)中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的接種密度為2-4×10⁵個(gè)/mL。

進(jìn)一步地，所述步驟(2)中取傳代培養(yǎng)至第3-5代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，所述傳代培養(yǎng)的比例為1:3-4。