[發明專利]包含免疫細胞的藥物組合物用于治療癌癥

有效

• 申請號: 202011018283.4
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN111920948B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 李偉強;劉歡;朱小明
• 申請（專利權）人: 安可瑞（山西）生物細胞有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K35/17;A61P35/00;C07K16/28;C12N5/0783
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本發明涉及包含免疫細胞的藥物組合物用于治療癌癥。本發明制備了特異性針對PD?L1的單克隆抗體，其具有較好的抑制肝癌細胞增殖的效果，此外，還通過分離以及優化獲得了能夠抑制肝癌細胞增殖的免疫細胞，通過將免疫細胞與PD?L1細胞組合使用，可以有效的治療肝癌，具有協同的作用，具有極好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物制藥領域，具體的涉及用于肝癌治療的領域，更近一步的涉及包含免疫細胞的藥物組合物用于治療癌癥。

背景技術

肝細胞癌（HCC）占原發性肝癌的70%～80%，世界范圍內是第6 位常見的癌癥，術后的復發以及轉移引起的死亡排名第3。在亞洲國家尤其是中國和日本，在明確診斷后的數周至數月內死亡率高，5 年生存率小于14%，術后5 年的復發率大于50%，術后5 年生存率只有30%～40%。

隨著醫學技術的發展，免疫細胞治療直接識別并殺傷患者血液和淋巴中的腫瘤細胞，在不損傷和破壞機體免疫系統和功能的前提下殺傷患者血液、淋巴中的腫瘤細胞，恢復并增強機體自然抗癌免疫系統。免疫細胞治療可減輕肝癌患者的放化療毒副作用，降低患者復發率，延長無進展生存時間和總生存期。

NK( natural killer cell，自然殺傷細胞) 細胞和NKT 細胞是固有免疫細胞的重要組成部分，均從骨髓衍生。在肝臟中定居的NK 細胞發揮宿主免疫作用來有效阻止細胞的腫瘤化。NK 細胞通過分泌細胞因子來調節其他免疫細胞的活性以及發揮細胞毒性。

自然殺傷細胞（NK）占人肝臟內淋巴細胞的25%～40%， 根據CD56 分子的表達量可分為CD56bright 和CD56dim 兩個亞群。其中CD56bright 亞群可被IL-2 刺激后擴增，約10%表達殺傷細胞免疫球蛋白樣受體（KIR），可分泌合成TNF 相關的凋亡誘導配體（TRAIL）；而CD56dim 亞群對IL-2 刺激不敏感，85%的CD56dim 為KIR+，分泌合成穿孔素和顆粒酶B。當HCC 發生時，一方面肝癌細胞表面表達Rae1，該因子作為NK 細胞活化受體NKG2D 的配體可以活化NK 細胞，促使其發揮抗腫瘤免疫的作用。另一方面，NK 細胞的免疫功能受到限制，HCC 患者外周血中CD56dimNK 細胞亞群明顯少于健康對照組。同時HCC 患者腫瘤區域中的CD56dimNK 細胞表達的IFN-γ 少于非腫瘤區域，有體外實驗表明這與CD4+CD25+調節性T 細胞（Treg）相關。肝癌發生時，細胞外基質微環境的改變、HSC 分泌的TGF-β 等可以抑制NK 細胞活性及功能， 進而使其對肝細胞的監視功能減弱。在正常的生理狀態下，NK 細胞通過產生“細胞溶解顆粒”來發揮生理作用，這種顆粒中包含有穿孔素、顆粒酶、腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體和INF-γ。NKT 細胞是T 淋巴細胞的一個亞群，細胞功能與T 細胞和NK 細胞相重合，也表達αβT 細胞受體和多種NK細胞受體，是一種IL-4， IFN-γ 和TNF-α等細胞因子的重要分泌源。NK 細胞的抗腫瘤能力與NKG2D 和MICA 的表達水平密切相關。Chen 等證實了蝎毒多肽( PESV) 可通過調節MICA-NKG2D 通路增強NK 細胞的抗腫瘤能力。Jiang等也發現人IL-15 基因修飾的NK 細胞 NKL_IL15) 在HCC 荷瘤小鼠中表現出較強的抑瘤活性。研究顯示，RFA可有效激活HCC 患者外周血中NK 細胞的活性。

目前已有研究表明CIK細胞 聯合貝伐單抗在體內外對HepG2細胞增殖、侵襲、遷移均有抑制作用，且優于單獨治療組。但是抗體應用僅限于貝伐單抗，成本較高。隨著分子生物學、免疫學、基因工程等研究的不斷深入，腫瘤的免疫細胞治療得到了長足的發展和廣泛的應用。然而，如何進一步提高療效，仍然是腫瘤免疫細胞治療所亟待解決的問題。將單抗與免疫細胞進行組合使用已經顯示了治療法可行性，為肝癌的治療提供了新手段。但是目前研究較少。

發明內容

本發明克服了現有技術的缺陷，提供了一種免疫細胞聯合單抗治療肝癌的方法。

一方面，本發明提供了一種特異性的PD-L1單克隆抗體4-G3，重鏈可變區序列為：