[發明專利]從臍帶血制備PRP的方法及制備PRP在制備糖尿病性難愈合創傷藥物中的應用

在審

• 申請號: 202011017166.6
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112336748A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 杜為;張莉;張亞斌;賀雪萍;楊俊曄;韓俊領;張宇;楊文玲
• 申請（專利權）人: 協和干細胞基因工程有限公司
• 主分類號: A61K35/16
• 分類號: A61K35/16;A61P17/02;A61P3/10
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王顕

本發明公開了一種從臍帶血制備PRP的方法及制備PRP在制備糖尿病性難愈合創傷藥物中的應用，包括如下步驟：使用優選的離心力對臍帶血進行第一次離心，去除下層的細胞層，使用優選的離心力將上層的血漿層進行第二次離心，用第二次離心后的上清(乏血小板血漿)調整血小板濃度為(1000±100)×10⁹/L，即得PRP，加凝血酶制備成凝膠使用，或PRP和第二次離心后上清(乏血小板血漿)分別于?20±2℃保存，使用時可根據需要調整血小板濃度。本制備方法在保證血小板高回收率的前提下降低了對離心力的要求，將制備好的臍帶血PRP應用到糖尿病性難愈合創傷修復作用的實驗研究中，能夠很好地促進糖尿病性難愈合創傷的修復。

技術領域

本發明涉及一種臍帶血PRP的制備方法，尤其是利用低離心力獲得高回收率臍帶血富血小板血漿(PRP)的離心制備方法及PRP在制備糖尿病性難愈合創傷藥物中的應用。

背景技術

富血小板血漿(Platelet-rich plasma,PRP)是將新鮮全血通過特定離心方式得到的含高濃度血小板的血漿，是一種血小板濃縮物，通常為人體正常血小板濃度的3-5倍，含有大量的多種生長因子[Mussano F,Genova T,Munaron L,et al.Platelets. 2016；27(5):467-471]。1984年，Okuda等首先發現從血漿中提取出來的PRP中含有多種生長因子[Umeno Y,Okuda A,Kimura G.Cell Sci.1989；94:567-575]。隨著PRP的研究的深入，1997年Whitman等率先將自體PRP制成血小板凝膠與自體骨或異體骨相結合用于口腔頜面外科手術得到了良好的臨床療效[Whitman DH,Berry RL,Green DM.Oral MaxillofacSurg.1997；55(11):1294-1299]。2018年，王澤蓉等應用同種異體PRP制成血小板凝膠治療難愈合性創面患者也取得了良好的效果，愈合率達到86％[王澤蓉,范婭涵,張紅等.臨床血液學雜志.2018；31(12):895-897]。

PRP富含多種生物活性蛋白，較為經典的包括多種生長因子和抗菌肽等，用在創傷修復過程中的不同階段可發揮不同的作用，促進傷口愈合及組織再生，因此已被廣泛應用于臨床領域，包括整形外科[Wang D,Rodeo SA.JBJS Rev.2017；5(9):e7]、骨科[FotouhiA,Maleki A,Dolati S,et al.Biomed Pharmacother.2018；104:652-660]、心肌再生[Spartalis M,Tzatzaki E,Nikiteas N,et al.Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017；21(18):3983-3984]和運動醫學[Kaux JF,Emonds-Alt T.Platelets. 2018；29(3):213-227]等的治療；加之PRP無論在體內或體外都具有一定的抑菌活性，并已經證明其對黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痤瘡丙酸桿菌等細菌均有抑制作用[Li T,Ma Y,Wang M,etal.Infect Drug Resist.2019；12:297-309]，特別是對慢性難愈性創面的愈合有促進作用[Ahmed M,Reffat SA,Hassan A,et al.Ann Vasc Surg.2017；38:206-211]，更使得PRP的應用越來越受到了臨床的重視和關注。PRP技術已經成為治療再生醫學相關疾病的治療手段。自體PRP技術已經成為醫院臨床治療的收費項目。異基因PRP技術在廣州軍區總醫院已經進行臨床試驗，得到非常好的治療效果 [Umeno Y,Okuda A,Kimura G.J CellSci.1989；94:567-575]。