[發明專利]枯草芽孢桿菌黑色變種培養基及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202011016253.X
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN111996154A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 龔海燕;湯琳;吳阿娜;懷紅燕;王琰
• 申請（專利權）人: 上海市環境監測中心（上海長三角區域空氣質量預測預報中心）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;C12R1/125
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 李佳俊;郭國中

本發明提供了一種枯草芽孢桿菌黑色變種培養基及其制備方法與應用，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：胰蛋白胨0.5～4.0g，葡萄糖0.5～2.0g，氯化鈉0.5～1.0g，磷酸氫二鉀0.5～1.0g，七水硫酸鎂0.5～1.0g，L?天冬酰胺0.5～1.0g，L?酪氨酸0.5～1.0g，干酪素溶液10mL～60mL，微量鹽溶液1～2mL，瓊脂18～20g，余量為蒸餾水。本發明的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，誘導作用強，市面上枯草芽孢桿菌黑色變種產品均適用，而且在誘導產生穩定黑色素時，該培養基操作簡單，成本低，篩選效果強，還為其芽孢的配置應用提供菌種保障。

技術領域

本發明涉及微生物，具體地，涉及一種枯草芽孢桿菌黑色變種培養基及其制備方法和應用，尤其是一種枯草芽孢桿菌黑色變種產生穩定色素的誘導培養基及其配置和使用方法。

背景技術

枯草芽孢桿菌黑色變種(Baci llus subtil is var.niger)，國際上稱為萎縮芽孢桿菌，非致病菌，枯草芽孢桿菌的一個亞種。革蘭氏陽性芽孢桿菌，長2.0～4.0μm，寬0.5～1.0μm，單個或呈短鏈狀排列，芽孢橢圓形，中生，不膨大。

枯草芽孢桿菌黑色變種因能產生對熱、紫外線、電離輻射和某些化學物質很強抗性的芽孢，可以作為消毒劑檢測及滅菌質量控制方面的質量控制標準菌株進行應用。《美國藥典》將枯草芽孢桿菌黑色變種作為干熱消毒、環氧乙烷控制的生物指示劑及用于醫藥物品消毒與無菌保證；《歐洲藥典》將其作為殺菌法的生物指示劑；我國在《中國藥典》、《消毒與滅菌效果的評價方法與標準》(GB 15981-1995)、《消毒技術規范》均將枯草芽孢桿菌黑色變種作為消毒滅菌指示微生物；英國、瑞士等國標準協會在健康產品相關的標準或與醫療器械相關的標準中已將該菌株作為環氧乙烷滅菌、干熱滅菌和其它液體化學消毒劑的指示劑。

根據相關資料，枯草芽孢桿菌黑色變種在含有酪氨酸的培養基上可產生黑色菌落，但是黑色素形成十分不穩定。目前，尚無枯草芽孢桿菌黑色變種能產生穩定色素的培養基，因此，探索一種便捷、可靠、穩定的使枯草芽孢桿菌黑色變種產生黑色素的誘導培養基十分必要。

申請公布號為CN 105670964 A的發明公開了萎縮芽孢桿菌BsR05菌株及其應用。萎縮芽孢桿菌BsR05菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCCNO.11665。采用本發明菌株制備的萎縮芽孢桿菌BsR05的液體懸浮劑對黃瓜灰霉病具有特異的防治作用，防效高平均防效在70％以上。該萎縮芽孢桿菌產生黑色素量少不穩定。

發明內容

針對現有技術中的缺陷，本發明提供一種枯草芽孢桿菌黑色變種培養基及其制備方法和應用。

本發明的第一方面提供一種枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：胰蛋白胨0.5～4.0g，葡萄糖0.5～2.0g，氯化鈉0.5～1.0g，磷酸氫二鉀0.5～1.0g，七水硫酸鎂0.5～1.0g，L-天冬酰胺0.5～1.0g，L-酪氨酸0.5～1.0g，干酪素溶液10mL～60mL，微量鹽溶液1～2mL，瓊脂18～20g，余量為蒸餾水。

優選地，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：胰蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鉀0.5g，七水硫酸鎂0.5g，L-天冬酰胺1.0g，L-酪氨酸0.5g，干酪素溶液10ml，微量鹽溶液1mL，瓊脂20g，余量為蒸餾水。

優選地，所述干酪素溶液單獨配置，干酪素溶液的每100mL體系如下：干酪素5.0g，溶劑為0.1mol/L NaOH；將干酪素加入溶劑后加熱溶解得到。