[發明專利]枯草芽孢桿菌黑色變種培養基及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202011016253.X
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN111996154A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 龔海燕;湯琳;吳阿娜;懷紅燕;王琰
• 申請（專利權）人: 上海市環境監測中心（上海長三角區域空氣質量預測預報中心）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;C12R1/125
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 李佳俊;郭國中

1.一種枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，其特征在于，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：胰蛋白胨0.5～4.0g，葡萄糖0.5～2.0g，氯化鈉0.5～1.0g，磷酸氫二鉀0.5～1.0g，七水硫酸鎂0.5～1.0g，L-天冬酰胺0.5～1.0g，L-酪氨酸0.5～1.0g，干酪素溶液10mL～60mL，微量鹽溶液1～2mL，瓊脂18～20g，余量為蒸餾水。

2.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，其特征在于，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：胰蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鉀0.5g，七水硫酸鎂0.5g，L-天冬酰胺1.0g，L-酪氨酸0.5g，干酪素溶液10ml，微量鹽溶液1mL，瓊脂20g，余量為蒸餾水。

3.根據權利要求1或2所述的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，其特征在于，所述干酪素溶液單獨配置，干酪素溶液的每100mL體系如下：干酪素5.0g，溶劑為0.1mol/L NaOH；將干酪素加入溶劑后加熱溶解得到。

4.根據權利要求1或2所述的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，其特征在于，所述微量鹽溶液單獨配置，微量鹽溶液的每1000mL體系如下：七水合硫酸亞鐵1.0～2.0g，二水合氯化銅0.01～0.05g，六水合氯化鈷0.01～0.05g，二水合鉬酸鈉0.01～0.05g，氯化鋅0.01～0.02g，硼酸2.0～3.0g，四水合二氯化錳1.0～2.0g，酒石酸鈉1.0～2.0g，余量為蒸餾水。

5.根據權利要求4所述的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基，其特征在于，所述微量鹽溶液的每1000mL體系如下：七水合硫酸亞鐵1.360g，二水合氯化銅0.027g，六水合氯化鈷0.040g，二水合鉬酸鈉0.025g，氯化鋅0.020g，硼酸2.850g，四水合二氯化錳1.800g，酒石酸鈉1.770g，余量為蒸餾水。

6.一種制備權利要求1所述的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)準備原料：按配比，稱取胰蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂、L-天冬酰胺、L-酪氨酸、瓊脂，量取微量鹽溶液和干酪素溶液，所述微量鹽溶液和干酪素溶液提前單獨配置好；

(2)配置：在蒸餾水中，將步驟(1)中的原料按照胰蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂、L-天冬酰胺、L-酪氨酸、瓊脂、微量鹽溶液和干酪素溶液的順序逐一加入，待每一種原料溶解后加下一個原料，然后使用質量濃度為100g/L的NaOH或質量濃度為100g/L的HCl調節體系pH至7.0±0.2；將體系在115℃～121℃滅菌15min～30min后得到枯草芽孢桿菌黑色變種培養基。

7.一種利用權利要求1所述的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基在誘導產生穩定黑色素中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述誘導產生穩定黑色素的方法包括以下步驟：

(1)將配置好的枯草芽孢桿菌黑色變種培養基倒入無菌培養皿，每皿25～30ml，冷卻凝固后待用；

(2)將枯草芽孢桿菌黑色變種菌株在步驟(1)準備好的培養基上劃線或涂布接種，在培養基上得到穩定的黑色菌落；

(3)挑取培養基上培養得到的黑色菌落后提取其中的黑色素。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌黑色變種菌株為B.subtilis var.niger ATCC 9372。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述步驟(2)中，培養條件為36℃±1℃增殖培養72h～96h。