[發明專利]編碼ARL2BP的核酸及其應用

在審

• 申請號: 202011015907.7
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112063625A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 李斌;任盛
• 申請（專利權）人: 武漢紐福斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/867;C12N15/861;C12N15/864;A61K48/00;A61K38/17;A61P27/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及編碼ARL2BP的核酸及其應用。本發明對ADP?核糖基化因子樣蛋白2結合蛋白(ARL2BP)編碼基因序列進行了優化，從而獲得了一種特別適合在哺乳動物(如人)細胞中高效轉錄和高效表達ARL2BP蛋白的核苷酸序列(SEQ ID NO:3)，并構建了ARL2BP的重組表達載體。與未優化的ARL2BP的DNA編碼序列相比，優化后的序列ARL2BP蛋白表達水平顯著提高，能夠非常有效地治療視網膜色素變性，并且安全性好。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及編碼ARL2BP的核酸及其應用。

背景技術

視網膜色素變性(retinitis pigmentosa,RP)是一組進行性致盲的遺傳性視網膜疾病，以視網膜光感受器和色素上皮變性為主要特征，感光細胞的變性和凋亡是視力持續下降并最終失明的原因。流行病學調查顯示，西方國家發病率約為1/4000～1/3500，國內約1/4016～1/3467，現有的治療方法尚不能治愈，只能在不同程度上阻止RP進展。

基因治療是通過基因載體將外源性正常基因導入患者細胞內，以糾正或替代致病基因，眼與其他內臟器官相比更適合基因治療，因為眼部的相對封閉狀態及血-視網膜屏障能夠避免載體向體內擴散，使眼球處于部分免疫赦免狀態，從而限制了針對轉染基因及載體蛋白的免疫反應。

ARL2BP即ADP-核糖基化因子樣蛋白2結合蛋白(ADP ribosylation factor likeGTPase 2 binding protein)。ADP-核糖基化因子(ARF)樣蛋白(ARLs)由RAS相關GTPases的ARF家族中功能獨特的一組蛋白組成。由于ARF樣蛋白酶、效應蛋白和GTP酶激活蛋白在纖毛形成和信號傳導中起著關鍵作用，因此ARL2BP是纖毛相關疾病例如視網膜色素變性的基因治療的候選靶點。

但如何使ARL2BP能夠更有效的應用于RP的治療，仍是本領域需要解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供編碼ARL2BP的核酸及其應用，該編碼序列能夠提高ARL2BP的表達水平，提高防治RP的效果。并提供了并提供表達ARL2BP的腺相關病毒載體，并將它們應用于制備防治RP的藥物。

本發明提供的編碼ARL2BP的核酸，包括I)～IV)中至少一種：

I)、具有如SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的核酸；

II)、與I)所述核酸的序列至少具有85％的同源性，且編碼如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白的核酸；

III)、與I)～II)中任一項部分互補或完全互補的核酸。

本發明還提供了ARL2BP的轉錄單元，其包括：啟動子、所述的核酸和終止子。

在本發明中，所述啟動子為CMV啟動子。一些實施例中，所述CMV啟動子的核酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本發明還提供了一種重組載體，其包括骨架載體和所述的核酸。或者，所述重組載體包括骨架載體和本發明所述的轉錄單元。

本發明所述的重組載體為病毒載體；所述病毒載體選自DNA病毒載體、逆轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體中至少一種；其中，腺相關病毒載體的血清型為AAV2、AAV5、AAV6、AAV7、AAV2-7M8、AAV8或AAV9。一些實施例中，腺相關病毒載體的血清型為AAV2。一些具體實施例中，所述腺相關病毒載體的骨架載體為pscAAV2。

一些實施例中，所述重組載體中，包括AAV2 5’ITR，CMV啟動子，本發明所述的核酸，bGHpolyA序列和AAV2 3’ITR。

本發明所述的重組載體在制備防治眼部疾病的藥物中的應用。