[發(fā)明專利]一種腺苷酸環(huán)化酶制備環(huán)磷酸腺苷的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011015223.7
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112063670A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曉燕;李恒;王宏;傅得響;張燕
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州美亞藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C12P19/32
• 分類號: C12P19/32;C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70
• 代理公司: 北京天盾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11421
• 代理人: 張彩珍

1.一種腺苷酸環(huán)化酶制備環(huán)磷酸腺苷的方法，其特征在于，該方法包括：

以腺苷酸環(huán)化酶為催化劑，以三磷酸腺苷為底物，在Mg²⁺的存在下，獲得含有環(huán)磷酸腺苷的反應(yīng)液；

其中，所述腺苷酸環(huán)化酶具有如A1)、A2)、A3)、A4)、A5)或A6)所示的氨基酸序列：

A1)氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

A2)氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；

A3)氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；

A4)對A1)所限定的氨基酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失、插入或替換得到的具有95％以上的同源性的多肽片段或其突變體；

A5)對A2)所限定的氨基酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失、插入或替換得到的具有95％以上的同源性的多肽片段或其突變體；

A6)對A3)所限定的氨基酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失、插入或替換得到的具有95％以上的同源性的多肽片段或其突變體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，一種用于編碼如權(quán)利要求1所述的腺苷酸環(huán)化酶的基因，具有如B1)、B2)、B3)、B4)、B5)或B6)所示的核苷酸序列：

B1)核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

B2)核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

B3)核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

B4)對B1)所限定的核苷酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)核苷酸的缺失、插入或替換得到的具有90％以上的同源性的核苷酸序列；

B5)對B2)所限定的核苷酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)核苷酸的缺失、插入或替換得到的具有90％以上的同源性的核苷酸序列；

B6)對B3)所限定的核苷酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)核苷酸的缺失、插入或替換得到的具有90％以上的同源性的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸環(huán)化酶具有如A3)所示的氨基酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸環(huán)化酶在43-47℃的半衰期為90h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸環(huán)化酶由權(quán)利要求2所述的基因?qū)氲剿拗骶@得重組基因工程菌，通過誘導(dǎo)培養(yǎng)所述重組基因工程菌獲得。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述宿主菌為大腸桿菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述催化劑為含有腺苷酸環(huán)化酶的上清液。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述底物的濃度為10-100g/L，Mg²⁺的濃度為0.12-12g/L，腺苷酸環(huán)化酶上清液用量以腺苷酸環(huán)化酶酶活計(jì)為100-700U/mL。