[發明專利]一種miR-17-92修飾的間充質干細胞、外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011014601.X
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112251411A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 王立生;聶文博;孫慧燕;趙麗晶;張丹
• 申請（專利權）人: 吉林大學;中關村三有利再生醫學研究中心
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;A61K35/28;A61P17/02;A61P43/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明提供了一種miRNA?17?92修飾的間充質干細胞、外泌體及其制備方法和應用，屬于間充質干細胞基因改造的技術領域，所述間充質干細胞通過攜帶miR?17?92基因簇的慢病毒轉染獲得；所述的miRNA?17?92修飾的間充質干細胞的制備方法，包括以下步驟：1)分離并培養間充質干細胞；2)用攜帶miR?17?92基因簇的慢病毒轉染步驟1)中所述的間充質干細胞獲得miRNA?17?92修飾的間充質干細胞。本發明所述miRNA?17?92修飾的間充質干細胞外泌體能夠顯著提高人臍帶間充質干細胞的存活率、提高人臍帶間充質干細胞的遷移能力；能夠應用于制備促進皮膚傷口愈合的藥物。

技術領域

本發明屬于間充質干細胞基因改造的技術領域，尤其涉及一種miRNA-17-92修飾的間充質干細胞、外泌體及其制備方法和應用。

背景技術

皮膚經常因各種內在病理及外界機械因素而受損，這些急、慢性的皮膚缺損給患者及社會帶來了沉重的負擔。如何加速創面的愈合，促進創面的修復顯得尤為重要。皮膚損傷是多種細胞死亡方式和炎性因子相互作用的綜合結果，針對皮膚損傷的治療應該是綜合的再生策略。

在創面修復領域，間充質干細胞療法取得了可喜的治療效果。起初研究認為間充質干細胞發揮創面修復作用主要與其多向分化潛能有關，近來研究發現，MSC主要通過分泌細胞因子和外泌體(Exosomes)等發揮生物學功能。外泌體是細胞釋放的，直徑為50～100nm的微粒，含有磷脂、微小RNA等多種生物活性成分，是細胞間信息及遺傳物質的傳遞載體。干細胞來源的外泌體僅具有干細胞本身的生物學特性，因此如果能夠改變外泌體中的組成和豐度，可增強外泌體的效果，使干細胞外泌體更好的發揮促進血管新生、調節免疫、抑制纖維化、促進細胞增殖遷移與分化等作用；目前尚沒有一種有效的改變外泌體中的組成和豐度方法。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種miRNA-17-92修飾的間充質干細胞、外泌體及其制備方法和應用。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種miRNA-17-92修飾的間充質干細胞，所述間充質干細胞通過攜帶miR-17-92基因簇的慢病毒轉染獲得。

優選的，所述miR-17-92基因簇包括miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92a。

優選的，所述間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

本發明提供了所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞的制備方法，包括以下步驟：

1)分離并培養間充質干細胞；

2)用攜帶miR-17-92基因簇的慢病毒轉染步驟1)中所述的間充質干細胞獲得miRNA-17-92修飾的間充質干細胞。

優選的，所述轉染的MOI為8～12。

本發明提供了一種miRNA-17-92修飾的間充質干細胞外泌體，所述間充質干細胞外泌體表達miR-17-92基因簇。

本發明提供了所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞外泌體的制備方法，包括以下步驟：

培養所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞，收集培養液上清，將所述培養液上清進行第一離心，收集第一上清液，將所述第一上清液進行第二離心，收集第二上清液，將所述第二上清液與16％PEG 6000等體積混合、靜置后，進行第三離心，收集第三沉淀，將所述第三沉淀與無菌PBS混合重懸獲得間充質干細胞外泌體粗品；將所述間充質干細胞外泌體粗品與無菌PBS混合進行第四離心，收集第四沉淀，將所述第四沉淀與無菌PBS混合獲得間充質干細胞外泌體；

所述第一離心的離心力為450～550g，所述第一離心的時間為4～6min；