[發明專利]一種miR-17-92修飾的間充質干細胞、外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011014601.X
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112251411A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 王立生;聶文博;孫慧燕;趙麗晶;張丹
• 申請（專利權）人: 吉林大學;中關村三有利再生醫學研究中心
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;A61K35/28;A61P17/02;A61P43/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

1.一種miRNA-17-92修飾的間充質干細胞，其特征在于，所述間充質干細胞通過攜帶miR-17-92基因簇的慢病毒轉染獲得。

2.根據權利要求1所述的間充質干細胞，其特征在于，所述miR-17-92基因簇包括miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92a。

3.根據權利要求1或2所述的間充質干細胞，其特征在于，所述間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

4.權利要求1～3任意一項所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞的制備方法，包括以下步驟：

1)分離并培養間充質干細胞；

2)用攜帶miR-17-92基因簇的慢病毒轉染步驟1)中所述的間充質干細胞獲得miRNA-17-92修飾的間充質干細胞。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述轉染的MOI為8～12。

6.一種miRNA-17-92修飾的間充質干細胞外泌體，其特征在于，所述外泌體表達miR-17-92基因簇。

7.權利要求6所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞外泌體的制備方法，包括以下步驟：

培養權利要求1～3任意一項所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞，收集培養液上清，將所述培養液上清進行第一離心，收集第一上清液，將所述第一上清液進行第二離心，收集第二上清液，將所述第二上清液與16％PEG 6000等體積混合、靜置后，進行第三離心，收集第三沉淀，將所述第三沉淀與無菌PBS混合重懸獲得間充質干細胞外泌體粗品；將所述間充質干細胞外泌體粗品與無菌PBS混合進行第四離心，收集第四沉淀，將所述第四沉淀與無菌PBS混合獲得間充質干細胞外泌體；

所述第一離心的離心力為450～550g，所述第一離心的時間為4～6min；

所述第二離心的離心力為1800～2200g，所述第二離心的時間為25～35min；

所述第三離心的離心力為8000～12000g，所述第三離心的時間為50～70min；

所述第四離心的離心力為90000～110000g，所述第四離心的時間為60～80min。

8.權利要求1～3任意一項所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞、權利要求6所述的間充質干細胞外泌體在制備促進皮膚傷口愈合的藥物中的應用。

9.權利要求1～3任意一項所述的miRNA-17-92修飾的間充質干細胞、權利要求6所述的間充質干細胞外泌體在制備抑制鐵死亡的藥物中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述間充質干細胞外泌體能夠抑制鐵死亡相關分子A20、ACSL4和P53的表達，上調鐵死亡抑制分子GPX4的表達。