[發明專利]一種香豆素衍生物Th-HM1及其合成方法和應用

有效

• 申請號: 202011014086.5
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112079858B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 陰彩霞;晏湖明;霍方俊
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

1.一種香豆素衍生物Th-HM1，其特征在于，結構式為：

。

2.如權利要求1所述的一種香豆素衍生物Th-HM1的合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）按摩爾比1:1.8~2.3將4-（二乙氨基）-2-羥基苯甲醛、丙二酸二乙酯和催化量的哌啶溶解在無水乙醇中；將該混合物攪拌加熱至回流并保持6~8小時，接著減壓蒸發乙醇后加入等體積比的鹽酸和冰醋酸混合溶液，攪拌加熱至100~115 ℃繼續反應6~8小時；反應結束后，將該溶液倒入冰水中，逐滴加入NaOH溶液，調節上述反應溶液的pH至形成大量淺色沉淀；繼續攪拌30~50分鐘后過濾混合物，并用水洗滌、干燥，然后用甲苯重結晶，得到化合物1；

2）將等體積的DMF和POCl₃混合，在0~10 ℃下攪拌約30分鐘，接著將化合物1和上述混合物一同溶解在2.5~3.0倍體積的DMF中，并在60~65℃下攪拌10~14小時；然后倒入冰水中，加入質量濃度20%的NaOH溶液調節混合物的pH至產生大量沉淀物；過濾粗產物，用水洗滌、干燥，并在無水乙醇中重結晶得到化合物2；

3）按摩爾比為1:1.2~1.5將化合物2和脫氫乙酸溶解在氯仿中；添加催化量的哌啶，加熱至回流并保持3~5分鐘，接著緩慢滴加2倍量的三氟化硼乙醚，然后在該溫度下回流5~6小時，待混合液冷卻至室溫后濃縮，柱色譜法純化，得到純紫黑色產物Th-HM1；

所述的化合物1和化合物2的結構式為：

。

3.如權利要求1所述的香豆素衍生物Th-HM1在制備檢測細胞內半胱氨酸和谷胱甘肽濃度變化的探針試劑的應用。

4.一種逐級檢測半胱氨酸濃度下調進而引起谷胱甘肽濃度降低的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）、配制乙腈和PBS混合緩沖溶液，配制一系列含水量不同的乙腈和水的混合溶液，配制2 mmol/L的半胱氨酸水溶液、100 mmol/L的谷胱甘肽水溶液以及配置2 mmol/L和40mmol/L的權利要求1所述的Th-HM1的乙腈溶液；

（2）、將探針Th-HM1乙腈溶液溶于乙腈和PBS混合緩沖液中，在紫外可見光吸光光度計上監測探針Th-HM1隨時間推移吸光度的變化；配置同樣的溶液，以紫外吸收作為激發波長監測探針Th-HM1隨著時間的推移熒光強度的變化；

（3）、將探針Th-HM1溶于含水量不同的乙腈溶液中，然后分別測試它們的吸光度，隨著水含量比例增加，對應在594 nm和397 nm處的吸光度值降低，在455 nm處的吸光度逐漸增加；

（4）、將探針Th-HM1溶于純乙腈、體積比為1:1的乙腈與水混合溶液，探針Th-HM1最終濃度均為200 μmol/L，然后將它們分別滴在單晶硅片上，待其干燥后利用掃描電子顯微鏡對它們的形貌進行分析；

(5)、將不同濃度的半胱氨酸水溶液、谷胱甘肽水溶液分別對含探針Th-HM1的乙腈和水混合溶液進行濃度滴定，利用紫外可見光度計監測探針Th-HM1在594 nm處的吸光度變化。

5.如權利要求1所述的香豆素衍生物Th-HM1在制備細胞成像試劑中的應用。