[發明專利]一種香豆素衍生物Th-HM1及其合成方法和應用

有效

• 申請號: 202011014086.5
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112079858B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 陰彩霞;晏湖明;霍方俊
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發明提供了一種香豆素衍生物Th?HM1及其合成方法和應用，所述香豆素衍生物的中文名稱為(E)?4?(2?(7?(二乙氨基)?2?氧代?2H?色烯?3?基)乙烯基)?2,2?二氟?7?甲基?2H，5H?1l3,2l4吡喃并[3,4?e][1,3,2]二惡黃嘌呤?5?酮。本發明同時提供了一種逐級檢測半胱氨酸濃度下調進而引起谷胱甘肽濃度降低的方法，該方法基于所述香豆素衍生物，在PBS和乙腈混合(pH＝7.4，v/v＝1/1)溶液中通過紫外可見分光光度計和熒光光譜儀定性檢測半胱氨酸和谷胱甘肽濃度變化。該方法在細胞水平實現了對半胱氨酸濃度下調及進一步引起谷胱甘肽濃度降低的逐級檢測。

技術領域

本發明涉及香豆素衍生物，具體屬于一種香豆素衍生物及其合成方法，以及該衍生物在逐級檢測半胱氨酸濃度下調進而引起谷胱甘肽濃度降低的應用。

背景技術

半胱氨酸、同型半胱氨酸和谷胱甘肽是生物體內最廣泛的一類巰基小分子，它們不僅是多種含硫蛋白質的原料，而且在氧化應激、維持細胞穩態方面起著極為關鍵的作用。生物體內硫醇濃度異常極易誘發多種疾病，諸如帕金森、生長緩慢、風濕性關節炎、癌癥、阿爾茲海默病等。在癌細胞中硫醇含量遠高于正常細胞，清除半胱氨酸或谷胱甘肽正逐漸成為癌癥化療的新興手段，同時也需要強大的檢測方法來支撐醫療發展。熒光探針因其優異生物兼容性、原位高分辨成像、分析便捷等優點被公認為是最具有潛力用于醫療分析的一種方法，所以急需開發強有力的熒光探針來檢測生物體內硫醇濃度的變化。

近年來，出現了一系列檢測生物硫醇的熒光探針，從最初的單一硫醇特異性檢測到多種硫醇區分檢測以及發展為與硫醇相關的活性物質的同時檢測，這些探針已經取得了非常可觀的進展。但大部分工作仍停留在獨立的檢測而不能動態反映硫醇與其相關物質間的變化，這需要研究工作者們更進一步地展開深入研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種香豆素衍生物Th-HM1及其合成方法，以及該衍生物Th-HM1在細胞內實現逐級檢測半胱氨酸濃度下調進而引起谷胱甘肽濃度降低的應用。

本發明提供的一種香豆素衍生物Th-HM1，中文名稱為E)-4-(2-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-基)乙烯基)-2,2-二氟-7-甲基-2H，5H-1l3,2l4吡喃并[3,4-e][1,3,2]二惡黃嘌呤-5-酮，英文名稱為(E)-4-(2-(7-(diethylamino)-2-oxo-2H-chromen-3-yl)vinyl)-2,2-difluoro-7-methyl-2H,5H-2l4,3l3-py rano[4,3-d][1,3,2]dioxaborinin-5-one。其結構式為：

Th-HM1的合成方法，步驟為：

1)按摩爾比1:1.8～2.3將4-(二乙氨基)-2-羥基苯甲醛、丙二酸二乙酯和催化量的哌啶溶解在無水乙醇中；將該混合物攪拌加熱至回流并保持6～8小時，接著減壓蒸發乙醇后加入體積比為1:1的鹽酸和冰醋酸混合溶液，攪拌加熱至100～115℃使其另外反應6～8小時；反應結束后，將該溶液倒入冰水中，逐滴加入NaOH溶液，將上述反應溶液的pH調節至形成大量淺色沉淀；繼續攪拌30～50分鐘后過濾混合物，并用水洗滌濾餅、干燥、甲苯重結晶，得到化合物1；

2)將等體積的DMF和POCl₃混合，在0～10℃攪拌約30分鐘，接著將化合物1和上述混合物一同溶解在2.5～3.0倍體積的DMF中，并在60～65℃下攪拌10～14小時；然后倒入冰水中，加入質量濃度約20％的NaOH溶液調節混合物的pH至產生大量沉淀物；過濾粗產物，用水洗滌濾餅、干燥，并在無水乙醇中重結晶得到化合物2；

3)按摩爾比為1:1.2～1.5將化合物2和脫氫乙酸溶解在氯仿中；添加3～5滴哌啶，加熱至回流并保持3～5分鐘，接著緩慢滴加2當量的三氟化硼乙醚，然后在該溫度下回流5～6小時，待混合液冷卻至室溫后濃縮、柱色譜法純化，得到純紫黑色產物Th-HM1。