[發明專利]一種熒光微球活化劑復溶液及其應用

有效

• 申請號: 202011013808.5
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112143484B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發明（設計）人: 尚延平;李文葉;黃玲;張雪嬌;舒芹;趙愿安
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;G01N33/533;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

本發明涉及一種熒光微球活化劑復溶液及其應用，所述活化劑復溶液用于溶解EDC和NHS，由二甲基亞砜溶解配制的濃度20～100mM的MES緩沖液和質量濃度0.5～2％的表面活性劑S22 CHCMAL LA?9組成。本發明的活化劑復溶液，不僅減緩了EDC和NHS的水解速度，增強了活化劑的穩定性和活化效率；并且還顯著增強了活化后的熒光微球的穩定性，使其可在2?8℃穩定保存至少65天，并增強了檢測靈敏度。將本發明所述的活化劑復溶液應用于熒光微球活化和熒光微球免疫層析試紙條制備中，不僅操作方便，節省時間，適用范圍廣泛，標記工藝更加穩定，同時有效控制了批間差，適合大規模生產使用。

技術領域

本發明屬于生化檢測試劑技術領域，具體涉及一種熒光微球活化劑復溶液及其應用。

背景技術

熒光免疫層析技術是基于抗原抗體特異性免疫反應的新型膜檢測技術。該技術以固定有檢測線(包被抗體或抗原)和質控線(抗抗體)的條狀纖維層析材料為固定相，測試液為流動相，熒光標記抗體或抗原固定于連接墊，通過毛細管作用使待分析物在層析條上移動。對于帶有多個抗原決定簇的大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)，通常采用“三明治”型雙抗夾心免疫層析方法，即待測物在流動相作用下先與熒光標記抗體結合，當到達檢測線時再與包被抗體結合形成雙抗夾心的“三明治”型。

時間分辨熒光微球作為一種特殊的功能微球，每個微球中可能包裹成千上萬個熒光分子，可大大提高熒光的標記效率，有效提高了分析靈敏度；同時熒光微球表面修飾有合適密度的羧基或其他功能基團，用于與蛋白或抗體的共價偶聯，提高了標記物的穩定性。在熒光微球與蛋白或者抗體共價偶聯之前，微球羧基的活化是極其關鍵的一步，利用EDC和NHS作為交聯劑活化微球羧基是常用的采用的一種方法。傳統工藝中溶解化學試劑EDC和NHS時一般使用的是超純水，然而由于EDC和NHS在水中容易水解，因此需要現配現用，并且微球的羧基與EDC和NHS反應后形成酰胺鍵，使微球處于一種激發狀態，極其的不穩定，需要立即與蛋白或者抗體共價偶聯，否則微球將會影響共價偶聯的效果。因此每次進行活化步驟時都需重新配置EDC和NHS溶液，操作十分不方便，并且活化后的微球不穩定會影響活化效率進而影響檢測成品試紙條的批間差和靈敏度。

發明內容

本發明針對現有技術存在的缺陷，提供了一種熒光微球活化劑復溶液及其應用，通過特殊選取表面活性劑S22 CHCMAL LA-9，將其與二甲基亞砜配置的MES緩沖液復配作為活化劑復溶液用于溶解EDC和NHS，進而用于活化微球，從而得到了一種活化效率高，操作方便，且穩定性和靈敏度顯著增強的熒光微球免疫層析試紙條，并且批間差得到有效控制，適合大批量生產使用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種熒光微球活化劑復溶液，所述活化劑復溶液用于溶解EDC和NHS，所述活化劑復溶液由濃度20～100mM MES緩沖液和質量濃度0.5～2％的表面活性劑S22 CHCMAL LA-9組成，其中所述MES緩沖液由二甲基亞砜溶解MES配制而成。

本發明使用了一種活化劑復溶液，以替代傳統使用的超純水，用于溶解活化劑EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)制成活化劑，通過特殊選取表面活性劑劑S22 CHCMAL LA-9，使其與MES緩沖液和二甲基亞砜產生協同作用，可以減緩EDC和NHS的水解速度，使活化劑更加穩定，利于長期保存使用。將該活化劑用于熒光微球的活化也可顯著增強活化效率和活化后熒光微球的穩定性，其中表面活性劑劑S22CHCMAL LA-9可使熒光微球分布更加均一，顯著增強熒光微球的穩定性和偶聯效率，進而顯著增強了試劑的靈敏度。

進一步的，所述活化劑復溶液由濃度50mM MES緩沖液和質量濃度1％的表面活性劑S22 CHCMAL LA-9組成。通過對緩沖液和表面活性劑的濃度進行優化，得到了一種穩定性和靈敏度最優的活化劑復溶液。

本發明還提供了所述活化劑復溶液在熒光微球活化中的應用。