[發明專利]一種全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜的方法及全二維液相色譜裝置和系統

在審

• 申請號: 202011012917.5
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112129857A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 陳敏;董惠忠;沈世豪;王天南;戚大偉;王亮
• 申請（專利權）人: 上海煙草集團有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/20;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 金彥;許亦琳

本發明提供了一種全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜的方法及全二維液相色譜裝置和系統。該方法：對煙草進行樣品前處理后，采用全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜，第一維液相色譜采用苯基?己基柱，第二維液相色譜采用C18柱。該系統包括連通的前處理裝置和全二維液相色譜裝置；所述全二維液相色譜裝置包括第一維色譜單元、雙兩位四通閥和第二維色譜單元；所述第一維色譜單元包括第一維泵、第一維色譜柱和第一維定量環；所述第二維色譜單元包括第二維泵、第二維色譜柱、第二維定量環和檢測器。該方法和系統以全二維液相色譜(LC×LC)為基礎，通過搭建LC×LC分析平臺，建立煙草全二維指紋圖譜分析方法，實現不同類型煙草樣品進行比較分析。

技術領域

本發明涉及煙草指紋圖譜分析技術領域，具體涉及一種全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜的方法及全二維液相色譜裝置和系統。

背景技術

近年來，隨著儀器分析技術、檢測手段及計算機信息處理技術的迅速發展,煙草指紋圖譜技術也得到了飛速的發展。煙草是一種農產品，煙葉類型多樣，且不同產地、部位、年份煙葉樣品可能存在一定的差異。煙草指紋圖譜能夠有效地為煙草質量控制提供方法的模板和技術的平臺，目前的研究表明，薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)、高效毛細管電泳(HPCE)、高速逆流色譜(HSCCC)等是構建色譜指紋圖譜經常使用的方法，其中 GC、HPLC以柱效高、重復性好成為指紋圖譜檢測廣泛采用的方法。GC適用于沸點低、熱穩定的化學成分，而大多數成分適合采用HPLC技術。但僅采用常規一維液相色譜其峰容量有限，分離度不夠，成為了制約煙草指紋圖譜發展的瓶頸。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜的方法及全二維液相色譜裝置和系統，采用全二維液相色譜建立煙草化學成分指紋圖譜，并對不同類型煙草全二維指紋圖譜進行比較分析。全二維液相色譜具有高通量、高峰容量的優勢，所得到的煙葉全二維指紋圖譜信息量豐富。該方法具有準確度高，重現性好，前處理簡單且儀器自動化程度高，適用于煙草樣品的批量檢測。在該方法中，第一維采用苯基- 己基柱，第二維采用C18柱，具有較好的兼容性和正交性。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜的方法，對煙草進行樣品前處理后，采用全二維液相色譜分析煙草指紋圖譜，第一維液相色譜采用苯基-己基柱，第二維液相色譜采用C18柱。

優選地，還包括如下技術特征中的至少一項：

1)所述第二維液相色譜采用C18-UPLC柱；為加快第二維分離速度，采用C18-UPLC柱，增加流速，加快梯度，同時提高柱溫；

2)所述樣品前處理包括以下步驟：將煙末在甲醇的水溶液中超聲萃取，然后進行過濾；

3)所述第一維液相色譜的條件為：第一維色譜柱為Zorbax phenyl-hexyl色譜柱；進樣量：0.2～10μL；柱溫：20～40℃；流速：0.05～1mL/min；第一維流動相A1相為10mMNa₂HPO₄的水溶液；第一維流動相B1相為甲醇。

更優選地，特征3)中，Na₂HPO₄的水溶液pH值為5～9。

優選地，第一維液相色譜中，流動相梯度程序為：

0～30min，A1相：B1相體積比為98：2～60：40；

35～40min，A1相：B1相體積比為10：90～90：10；

41～60min，A1相：B1相體積比為50:50～98:2。

優選地，還包括如下技術特征中的至少一項：