[發明專利]一種封閉劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202011012133.2
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112114128B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 黃丹;來祥兵;趙愿安;舒芹
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 江慧

本發明提供了一種封閉劑及其制備方法，屬于免疫檢測技術領域，所述封閉劑包括活化后的動物抗體和活化后的滅活標記蛋白，所述活化后的滅活標記蛋白為對標記蛋白進行滅活，后進行活化獲得，所述標記蛋白包括堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶中的一種。所述方法包括：采用活化劑A對動物抗體處理，獲得活化后的動物抗體；將標記蛋白滅活，獲得滅活標記蛋白，后采用活化劑B對所述滅活標記蛋白處理，獲得活化后的滅活標記蛋白；將所述活化后的動物抗體和所述活化后的滅活標記蛋白混勻，后純化，獲得所述封閉劑。該新的封閉劑可以用于封閉固相載體上的位點(空白位點和活化位點)以減少標記物與固相載體的非特異性結合，進而提高試劑盒的靈敏度和精密度。

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域，涉及一種封閉劑及其制備方法。

背景技術

免疫分析法是基于抗原抗體高特異性和高靈敏性反應的一種技術，該技術已經在醫學檢驗、環境監測等方面得到廣泛應用。目前市場上常見的免疫分析產品有酶聯免疫檢測法(ELISA)、熒光免疫分析(FIA)、化學發光免疫分析(CLIA)、放射免疫分析(RIA)等；其基本檢測原理為：將一種抗體固定于固相載體上，用于捕獲樣本中待測物，然后加入樣本和標記物(標記物可為ALP/HRP、吖啶酯等標記的另一種抗體(夾心法)或待測物類似物(競爭法))，反應完成后清洗除去反應體系中未結合的物質，最后加入相應底物(AMPPD、CDPStar、魯米洛等)，底物與標記物反應產生信號，根據信號值和定標曲線計算出樣本中待測物濃度。

通常固相載體上的位點(空白位點和活化位點)不會完全被抗體占據，因而會有部分標記物通過非特異性吸附于固相載體，導致異常信號產生，進而干擾測試結果，影響測試的靈敏度、精密度。為提高檢測試劑的靈敏度和精密度，需要對包被抗體的固相載體上的位點進行封閉以減少非特異性吸附。目前常用的封閉劑有牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、動物抗體等蛋白溶液，此類封閉劑在進行封閉時，多以非特異性吸附的方式對固相載體空白位點進行封閉，以占據的方式阻止標記物與固相載體的空白位點進行結合。但是這種封閉方式存在兩個缺點：①封閉過程由于是非特異性吸附的方式導致結果是隨機的，仍然有部分空白位點未被封閉；②吸附的方式導致大量活化的位點未封閉，同樣會結合標記物從而影響測試結果。

因此急需開發一種新的封閉劑，以解決檢測試劑靈敏度和精密度差的問題。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種封閉劑及其制備方法，該新的封閉劑可以用于封閉固相載體上的位點(空白位點和活化位點)以減少標記物與固相載體的非特異性結合，進而提高試劑盒的靈敏度和精密度。

本發明通過以下技術方案實現：

本發明的目的之一在于提供一種封閉劑，所述封閉劑包括活化后的動物抗體和活化后的滅活標記蛋白，所述活化后的滅活標記蛋白為對標記蛋白進行滅活，后進行活化獲得，所述標記蛋白包括堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶中的一種。

進一步地，所述活化后的動物抗體和所述活化后的滅活標記蛋白的質量比為1：(0.5～4)。

更進一步地，所述活化后的動物抗體和所述活化后的滅活標記蛋白的質量比為1：(2.5～3.5)。

進一步地，所述動物抗體為純度＞95％的IgG或IgM抗體；所述動物抗體的來源包括鼠、兔、山羊、牛源中的一種。

本發明的目的之二在于提供所述的封閉劑的制備方法，所述方法包括：

采用活化劑A對動物抗體處理，獲得活化后的動物抗體；

將標記蛋白滅活，獲得滅活標記蛋白，后采用活化劑B對所述滅活標記蛋白處理，獲得活化后的滅活標記蛋白；

將所述活化后的動物抗體和所述活化后的滅活標記蛋白混勻，后純化，獲得所述封閉劑。