[發明專利]一種包含長鏈脂肪二酸側鏈的多肽的制備方法

有效

• 申請號: 202011007915.7
• 申請日: 2020-09-23
• 公開（公告）號: CN112110981B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 馬亞平;戴政清;張凌云;王宇恩;付信;周迎春;王慶磊
• 申請（專利權）人: 深圳深創生物藥業有限公司
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;C07K14/605
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種包含長鏈脂肪二酸側鏈的多肽的固相合成方法，其中包含長鏈脂肪二酸的多肽具有式I所示結構；

其中，n＝4-30；

A₁和A₂分別為多肽段，A₁多肽段中包含5-50個氨基酸殘基；

A₂多肽段中包含5-50個氨基酸殘基；

其特征在于，包括以下步驟：

1)將含有6-32個碳原子的長鏈二酸化合物偶聯至固相合成樹脂上；得到長鏈二酸-固相合成樹脂偶聯物；

2)在長鏈二酸-固相合成樹脂偶聯物上偶聯H-Glu(OAll)-OtBu；

3)脫除OAll保護基團，然后依次偶聯H-AEEA-OAll、H-AEEA-OAll、Fmoc-Lys-OAll；

4)再逐一偶聯用于形成A₂多肽段的羧基保護基團保護α羧基的氨基酸或酰胺基保護基團保護的氨基酸酰胺；

5)脫除Fmoc保護基，并逐一偶聯用于形成A₁多肽段的Fmoc保護α氨基的氨基酸；

6)裂解所有保護基同時裂解樹脂獲得粗肽；

7)純化得到包含長鏈脂肪二酸的多肽；

其中，包含長鏈脂肪二酸的多肽選自司美格魯肽(Semaglutide)或替爾泊肽(Tirzepatide)。

2.根據權利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步驟3)中依次偶聯H-AEEA-OAll、H-AEEA-OAll、Fmoc-Lys-OAll的方法為，偶聯H-AEEA-OAll，然后脫除OAll保護基團，再偶聯H-AEEA-OAll，然后脫除OAll保護基團，再偶聯Fmoc-Lys-OAll，然后脫除OAll保護基團。

3.根據權利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步驟4)中，在步驟3)偶聯的Lys上，從N端向C端延伸偶聯，依次偶聯氨基酸的方法為，偶聯側鏈和羧基均被保護基保護的氨基酸，然后脫除羧基保護基，再偶聯側鏈和羧基均被保護基保護的氨基酸，然后脫除羧基保護基，繼續循環直至完成A₂多肽段；其中除C末端偶聯的最后一個氨基酸外其他氨基酸的羧基保護基選自OAll保護基團；

C末端偶聯的最后一個氨基酸羧基保護基選自-OtBu保護基團；

或者，

偶聯側鏈和羧基均被保護基保護的氨基酸，然后脫除羧基保護基，再偶聯側鏈和羧基均被保護基保護的氨基酸，然后脫除羧基保護基，繼續循環形成多肽鏈，最后在C端末端偶聯側鏈和酰胺基均被保護的氨基酸酰胺；

其中除C末端偶聯的最后一個氨基酸外其他氨基酸的羧基保護基選自OAll保護基團；

C末端偶聯的最后一個氨基酸酰胺的酰胺基保護基選自Trt保護基團。

4.根據權利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步驟2)、3)、4)和5)中偶聯條件為DIC與A的組合，或B、A和C的組合，或C與D的組合，其中A為HOBt或HOAt或Oxyma，B為HBTU、HATU、PyBOP，C為DIPEA或TMP或DMAP，D為T3P。

5.根據權利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步驟3)和4)中脫除OAll保護基團的方法為以Pd⁰(Ph₃P)₄和PhSiH₃對OAll保護基團進行脫除。

6.根據權利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，其中Pd⁰(Ph₃P)₄的摩爾量為OAll保護基團摩爾量的0.01-1.0，PhSiH₃的摩爾量為OAll保護基團摩爾量的1-10倍。

7.根據權利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步驟5)中，在步驟2)偶聯的Lys上，從C端向N端延伸偶聯，依次偶聯氨基酸的方法為，偶聯側鏈和氨基均被保護基保護的氨基酸，然后脫除氨基保護基，再進行偶聯直至完成A₁多肽段；其中氨基保護基選自Fmoc保護基團。