[發明專利]粘蛋白和循環腫瘤細胞的均相可視化/熒光POCT檢測方法

有效

• 申請號: 202011002429.6
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112129736B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 陳飄飄;應斌武;謝軼;王玥;何雅秦;耿佳
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院;成都華西精準醫學產業技術研究院有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/574
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 李俊

1.一種粘蛋白均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

在MOPS緩沖液中加入HP-DNA，AgNO₃或者Hg(NO₃)₂/HgCl₂溶液，室溫下避光反應，形成具有C-Ag⁺-C結構或者T-Hg²⁺-T結構的A液；

直接向A液中加入不同濃度的粘蛋白，室溫下反應后，加入發光CdTe QDs或者CdSeQDs，反應后測定熒光值；

或者在MOPS緩沖液中加入P1-DNA和核酸適配體，室溫下反應，形成雙鏈DNA后，在加入不同濃度的粘蛋白，完成競爭反應，釋放游離P1-DNA鏈，形成B液，將B液加入A液，再加入Helper-DNA，室溫反應，最后加入發光CdTe QDs或者CdSe QDs，反應后測定熒光值。

2.根據權利要求1所述的粘蛋白均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于：當直接向A液中加入不同濃度的粘蛋白時，熒光信號強度變化與0.25-10ng/mL濃度范圍內的粘蛋白呈現線性關系，其線性方程為Y＝-633C+9664，線性相關性系數R²＝0.990。

3.根據權利要求1所述的粘蛋白均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于：當將B液加入A液時，粘蛋白在1fg/mL-1pg/mL濃度范圍內，紫外燈照射下，肉眼可區分fg/mL級別的粘蛋白，顏色由紅色逐漸變淺，然后逐漸變為藍色。

4.根據權利要求1所述的粘蛋白均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于：當將B液加入A液時，粘蛋白在1fg/mL-1pg/mL濃度范圍內，熒光信號降低與粘蛋白濃度的對數呈現線性關系，其線性方程為Y＝-922LogC-8329，線性相關性系數R²＝0.976。

5.一種循環腫瘤細胞的均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

緩沖液中加入HP-DNA和AgNO₃/Hg²⁺溶液，室溫下避光反應，形成具有C-Ag⁺-C結構或者T-Hg²⁺-T結構的A液；

緩沖液中加入P1-DNA和核酸適配體，室溫下反應一段時間，加入不同濃度的循環腫瘤細胞，繼續反應，釋放游離P1-DNA，形成B液：

將B液加入A液，再加入Helper-DNA，室溫反應；

最后加入發光CdTe QDs或者CdSe QDs，反應后測定熒光值。

6.根據權利要求5所述的循環腫瘤細胞的均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于，熒光信號的降低與100-10⁵cells/mL范圍內循環腫瘤細胞濃度的對數呈線性關系，其線性方程為Y＝-1029LogN+7771，線性相關系數R²為0.994。

7.根據權利要求5所述的循環腫瘤細胞的均相可視化/熒光POCT檢測方法，其特征在于，所述HP-DNA包括HP1-DNA和HP2-DNA；

在含有AgNO₃/Hg²⁺的緩沖溶液中分別加入HP1-DNA和HP2-DNA，形成兩種C-Ag⁺-C結構或者T-Hg²⁺-T結構，室溫下避光反應后混合，形成A液；

在緩沖液中加入P1-DNA、P2-DNA和核酸適配體，室溫下反應形成適配體-P1-P2雙鏈DNA，加入待測不同濃度的循環腫瘤細胞反應，釋放出游離P1鏈和P2鏈，形成B液；

將B液加入A液，再加入Helper-DNA1和Helper-DNA2，室溫反應；

最后加入發光CdTe QDs或者CdSe QDs，反應后測定熒光值。