[發明專利]花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法在審
| 申請號： | 202011002187.0 | 申請日： | 2020-09-22 |
| 公開（公告）號： | CN112210570A | 公開（公告）日： | 2021-01-12 |
| 發明（設計）人： | 鄭思鄉;廖曉珊;榮朵艷;周俊;張翔;譚益民;湯建新;宋志偉;鄧雅文;林慶丹;吳龍云 | 申請（專利權）人： | 株洲市農業科學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/56 |
| 代理公司： | 北京智宇正信知識產權代理事務所(普通合伙) 11876 | 代理人： | 于理科 |
| 地址： | 412000 *** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 花粉 除草劑 百合 培育 方法 | ||
1.花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，步驟包括：
S1.構建重組載體
將啟動子TA29和終止子Nos加載到Barnase基因上，獲得TA29-Barnase-NOs，將TA29-Barnase-Nos插入到載體I上，然后進行擴繁后提取重組質粒；其中TA29-Barnase-NOs序列如SEQ ID NO：1所示；
S2.步驟S1獲得的重組質粒回收目標DNA作為模板，進行PCR擴增后連接到載體II上，獲得重組載體；
S3.將構建好的重組載體利用農桿菌介導法轉入百合鱗片，通過除草劑篩選法獲得陽性植株，并進行農桿菌介導法體系優化，先后轉入生根和發芽誘導培養基中培養，
獲得陽性轉基因百合。
2.如權利要求1所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，所述載體I為pUC57-simple載體。
3.如權利要求1所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，所述載體II為Pcambia3301載體。
4.如權利要求1所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，所述步驟S1中，在啟動子TA29和Barnase基因之間插入SpeⅠ、PstⅠ酶切位點。
5.如權利要求1所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，所述步驟S3中除草劑為草甘膦，篩選濃度為1～3mg/L。
6.如權利要求1所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，所述步驟S3中農桿菌介導法中采用的農桿菌濃度為OD600值為0.4～1.0，侵染時間為5～15分鐘，共培養時間≤4天。
7.如權利要求5所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，草甘膦篩選濃度為2.0mg/L。
8.如權利要求6所述的花粉敗育和抗除草劑百合的培育方法，其特征在于，所述步驟S3中農桿菌介導法中采用的農桿菌濃度為OD600值為0.8，侵染時間為10分鐘，共培養時間3天。
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